甲基化敏感擴增多態(tài)性,它是在擴增片段長度多態(tài)性技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的。MSAP技術(shù)相對其他測定DNA甲基化程度技術(shù)有如下優(yōu)點:(1)不需知道被測DNA的序列信息,在不同生物上具有通用性,可用于DNA序列背景知識未知的生物。(2)操作相對簡便,在AFLP技術(shù)體系的基礎(chǔ)上不需要太大改進(jìn),即可操作。(3)可在全基因組范圍檢測CCGG位點的胞嘧啶甲基化變化。MSAP技術(shù)的局限性在于不能完成非CCGG位點的胞嘧啶甲基化。
MSAP的選擇擴增產(chǎn)物目前主要通過兩種方法進(jìn)行分離檢測,傳統(tǒng)的聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)的方法和自動化程度較高的毛細(xì)管凝膠電泳(FISH)進(jìn)行檢測。
PAGE方法主要是優(yōu)點是引物可以是普通引物,價格相對較低,適用于少量樣本或者大量樣本的引物篩選比較合適,另外還可以對差異條帶進(jìn)行克隆測序,獲得差異條帶的序列信息。
毛細(xì)管電泳檢測方法的優(yōu)點是自動化,可以對大量樣本進(jìn)行實驗,速度快,后期的條帶讀取可以依靠軟件,降低了人為讀取的標(biāo)準(zhǔn)不一。
1)MSAP實驗路線
前期確認(rèn)階段:試驗樣本類型,數(shù)量,引物,簽訂試驗合作合同;
試驗階段:DNA提取,酶切,預(yù)擴增,選擇性擴增,電泳檢測;若需要克隆,進(jìn)行目的條帶的回收并測序(周期視工作量而定);
數(shù)據(jù)分析:和客戶詳細(xì)溝通,確認(rèn)分析方案:讀取01矩陣;
2)目前已經(jīng)進(jìn)行的樣本類型:
樹木,草,花卉,昆蟲,魚類,蝦類等
3)客戶須知:
本公司需要簽訂技術(shù)服務(wù)合作合同;
本公司再試驗結(jié)束后,如沒要求,試驗樣本將統(tǒng)一銷毀;
本公司不接受具有致病性和潛在危險的原始樣本,此類樣本請您提供樣本DNA。
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北京博友順生物技術(shù)有限公司,經(jīng)過幾年的發(fā)展公司更專業(yè)于分子標(biāo)記技術(shù)服務(wù)。公司致力于:基因組SSR引物開發(fā)、AFLP檢測、SSR/STR技術(shù)服務(wù)、ISSR、MSAP、SNP基因分型、條形碼分析、克隆分子實驗。本著“質(zhì)量第一,服務(wù)至上”的原則為各大院校、醫(yī)院、科研院所等單位,提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù),最大程度的滿足用戶的需要。
公司感謝廣大老師五年來對公司的厚愛和支持,將再接再厲為廣大老師做好科研后勤工作。我們非常慶幸能成長在生物行業(yè)剛剛起航的年代里,能跟隨各位老師前輩們共進(jìn)步、共成功