微衛星標記(Microsatellite)也稱為短串聯重復序列(STR)或簡單重復序列(SSR),是廣泛分布在真核生物基因組中的簡單重復序列。
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微衛星位點通常通過PCR擴增和電泳檢測,并根據片段大小分離等位基因進行分析;擴增后的等位微衛星可以用多種方法檢測,1)傳統方法采用聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染的方法適用于前期批量引物篩選;2)利用ABI遺傳分析儀對熒光標記的DNA片段進行檢測,結合分子量內標進行DNA片段長度計算,使STR分型變得高效快捷,適合大量樣本的檢測。
1.提供服務內容
1 按照客戶要求設計實驗方案,包括是否需要引物篩選,熒光標記的選擇,引物的設計、合成和標記;引物組合的確定;
2-1 按照設計的試驗方案完成引物篩選;(如果已經選好跳過這一步)
2-2 完成熒光PCR,并在3730xl測序儀上完成數據采集;(前期會進行預實驗)
3 對沒有擴增出來的進行二次PCR,再次檢測;
4 對收集的數據進行處理,提取結果圖譜
5 可以去除影子帶進行片段統計
6 標準分析: 根據毛細管電泳圖譜,將檢測峰判讀為對應的等位基因;
高級分析: 聚類分析;多樣性分析;多態位點數(AP)、多態位點百分率( P)、平均等位
基因數(Na)、有效等位基因數(Ne)、Nei′s基因多樣性指數(H)、Shanno′s
信息指數(I)、遺傳分化度(Gst)等。
2.目前已經進行的樣本類型:樹木,草,花卉,昆蟲,魚類,蝦類,真菌等;
3.客戶提供:
★ 基因組DNA:
●至少15μL樣品,濃度為50-100ng/μL;
●2%瓊脂糖電泳檢測有DNA主帶,沒有降解;
●DNA經過DNA純化試劑盒或磁珠純化;
●DNA需溶解在TE或滅菌的去離子水里;
●DNA溶解后,肉眼看不到雜色;
★ 植物材料: 新鮮組織,葉片采用硅膠干燥后或干冰運輸;
★ 動物材料: 新鮮組織,無水乙醇封存低溫運輸;
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