Dnmt1基因編碼DNA甲基轉移酶I，可將甲基轉移到基因組DNA的胞嘧啶核苷酸上，該基因的異常與耳聾、小腦共濟失調等神經系統疾病有關。今天和大家見面的是Dnmt1基因編輯小鼠。

⭐ Dnmt1基因簡介
該基因編碼DNA甲基轉移酶I，該酶是DNA胞嘧啶甲基化的維持酶，可將甲基轉移到基因組DNA的胞嘧啶核苷酸上，在胚胎發生期間和出生后的中樞神經系統（CNS）高表達。該基因的變異與小腦共濟失調、耳聾和發作性睡病等神經系統疾病有關。其相關途徑包括激活的PKN1刺激AR（雄激素受體）調節基因KLK2和KLK3的轉錄以及胞嘧啶甲基化。
 

圖1. Dnmt1的基因相關信息（https://rddc.tsinghua-gd.org/）

圖2. Dnmt1蛋白結構（https://alphafold.ebi.ac.uk/）

⭐ Dnmt1相關疾病介紹
與DNMT1相關的疾病有小腦共濟失調、耳聾和發作性睡病等神經系統疾病。

小腦共濟失調是因腦組織變形而引起的隨意運動失調的病癥，小腦共濟失調的主要臨床癥狀為四肢共濟失調、吞咽困難、眼球突出、肌張力障礙、痙攣等。該癥可分為繼發性小腦共濟失調和遺傳性小腦共濟失調。繼發性小腦共濟失調的致病因素有感染、乙醇中毒、維生素缺乏、代謝疾病、心血管疾病及腫瘤等。遺傳性小腦共濟失調可分為常染色體顯性遺傳性、常染色體隱性遺傳性以及X連鎖性小腦共濟失調。該病的治療藥物有激素類藥物（腎上腺皮質激素）、免疫球蛋白與丁螺環酮等[1,2]。

⭐ Dnmt1基因編輯小鼠
✔ CNS前體細胞特異性敲除小鼠：
Fan G等人在Dnmt1基因4和5號外顯子兩側插入loxp位點，再通過與Nestin-Cre轉基因小鼠雜交，以產生敲除4和5號外顯子序列的CNS前體細胞特異性敲除小鼠。研究人員對剖腹產的E18.5和E19.5小鼠進行分析發現，與對照小鼠（Dnmt12lox/2lox）相比，特異性敲除小鼠（Dnmt12lox/2lox；Nestin-Cre）在產后1h內死亡。電生理學結果表明，正常小鼠產后5min舌下神經活動表現出有節奏的類似喘息的模式圖（12/min），隨著呼吸頻率和心率的增加，其舌下神經活動也加快，并在10-20分鐘內保持平穩，相比之下Dnmt12lox/2lox；Nestin-Cre小鼠僅產生零星的喘息活動，并在分娩后20-30分鐘持續心跳異常，不久后死亡。病理組織學結果表明，Dnmt12lox/2lox；Nestin-Cre小鼠腦干舌下神經元形態正常（圖3）［3］。

✔ PV細胞敲除小鼠：
Hahn A等人將Dnmt1loxP2與Pvalb-Cre/tdTomato小鼠交配，以產生PV（小白蛋白）細胞敲除小鼠。研究發現，WT（Pvalb-Cre/tdTomato）小鼠運動和視覺皮層區域的tdTomato細胞顯著減少，表層和深層皮質層均受到中間神經元減少的影響，小鼠的細胞密度在12月齡時開始呈下降趨勢，這表明中間神經元是12月齡開始退化的。與WT相比，16月齡的Dnmt1 KO（Pvalb-Cre/tdTomato/Dnmt1loxP2）小鼠的運動和視覺皮層區域tdTomato陽性中間神經元密度顯著更高。以上結果表明，Dnmt1缺失顯著提高了表達PV的皮質中間神經元的長期存活率，Dnmt1功能直接或間接損害老年小鼠皮質PV中間神經元存活率（圖4）［4］。

圖3. 第１２顱舌下神經活動。

圖注：A：舌下神經呼吸放電的電生理記錄。每條跡線圖均是用皮下電極獲得的心電圖記錄（第二條跡線圖為膈肌電圖）。B：腦干舌下神經元組織學切片，E18.5石蠟切片。比例尺：37.5 μm。

圖4. Dnmt1 敲除增強了皮質中間神經元的長期存活率。

圖注：(A,B)：矢狀切片(Bregma 1.44)顯微照片顯示6、12和16個月大的Pvalb-Cre/tdTomato (WT, A) 和 Pvalb-Cre/tdTomato/Dnmt1loxP2 ( KO，B)小鼠顯示tdTomato（紅色）和DAPI陽性細胞（藍色）。每個區域的細胞密度在 (C) 中進行了量化。（D）：6個月和16個月大的Dnmt1 WT和KO小鼠在運動，體感和視覺皮層中的細胞密度的特異性分析。分析切片的數量如下：6個月大的WT：運動皮層n=16，軀體感覺皮層n=15，視覺皮層n=13；6個月大的KO：運動皮層 n=19，體感和視覺皮層 n=16；12個月大的WT和KO：每個皮層區域n=9個切片；16個月大的WT：運動和視覺皮層n=14，體感皮層n=12；16個月大的 KO每個皮質區域n=9（來自每個基因型和年齡的N=3個不同的大腦）。比例尺：100 μm。

⭐ 總結
小鼠Dnmt1功能喪失所導致的神經系統異常具有潛在的臨床意義，對該基因的深入研究有助于探討神經系統疾病的發病機制，同時亦可用于此類疾病治療新方法的研究。

⭐ 參考文獻：

1. Miranda CO, Nobre RJ, Paiva VH, Duarte JV, Castelhano J, Petrella LI, Sereno J, Santana M, Afonso S, Januário C, Castelo-Branco M, de Almeida LP. Cerebellar morphometric and spectroscopic biomarkers for Machado-Joseph Disease. Acta Neuropathol Commun. 2022 Mar 19;10(1):37. doi: 10.1186/s40478-022-01329-4. PMID: 35305685; PMCID: PMC8933766.

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3. Fan G, Beard C, Chen RZ, Csankovszki G, Sun Y, Siniaia M, Biniszkiewicz D, Bates B, Lee PP, Kuhn R, Trumpp A, Poon C, Wilson CB, Jaenisch R. DNA hypomethylation perturbs the function and survival of CNS neurons in postnatal animals. J Neurosci. 2001 Feb 1;21(3):788-97. doi: 10.1523/JNEUROSCI.21-03-00788.2001. PMID: 11157065; PMCID: PMC6762314.

4. Hahn A, Pensold D, Bayer C, Tittelmeier J, González-Bermúdez L, Marx-Blümel L, Linde J, Groß J, Salinas-Riester G, Lingner T, von Maltzahn J, Spehr M, Pieler T, Urbach A, Zimmer-Bensch G. DNA Methyltransferase 1 (DNMT1) Function Is Implicated in the Age-Related Loss of Cortical Interneurons. Front Cell Dev Biol. 2020 Jul 22;8:639. doi: 10.3389/fcell.2020.00639. PMID: 32793592; PMCID: PMC7387673.