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2D與3D實時可視化細(xì)胞趨化實驗操作詳解

瀏覽次數(shù):1338 發(fā)布日期:2024-9-13  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

趨化性試驗用于分析某種細(xì)胞類型是否直接向特定趨化因子定向和遷移。由于趨化性在癌癥發(fā)展和免疫浸潤過程中是一個特別重要的過程,趨化性試驗中常用的細(xì)胞類型是癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞。

趨化性試驗可以研究:

  • 目的基因敲除、敲低或過表達(dá)后細(xì)胞的趨化行為

  • 物質(zhì)的趨化潛力

  • 趨化性抑制劑和增強劑的作用

  • 趨化性和化學(xué)運動性之間的區(qū)別(增強遷移)

  • 趨化過程中的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

  • 趨化過程中細(xì)胞骨架的變化

 HT-1080細(xì)胞轉(zhuǎn)染LifeAct-TagGFP2 在2D表面上趨化遷移。
 

2D 與 3D 趨化性檢測

許多細(xì)胞自然生長在3D環(huán)境中。體外培養(yǎng)時,細(xì)胞附著在平坦的2D表面上,其行為可能與在3D凝膠基質(zhì)中不同。在許多情況下,3D環(huán)境更接近體內(nèi)情況,在規(guī)劃趨化性試驗時應(yīng)考慮到這一點。

使用µ-Slide Chemotaxis,可以輕松在水基凝膠(如Ⅰ型膠原蛋白和 Matrigel)中建立趨化梯度,因為凝膠結(jié)構(gòu)不會阻礙擴散。感興趣可以聯(lián)系我們有關(guān) 3D 趨化性測定的優(yōu)點和缺點的更多信息。

HT-1080 癌細(xì)胞在 2D 表面上粘附(左)并嵌入 3D I型膠原蛋白(右)的顯微鏡觀察示意圖。
 

ibidi µ-Slide Chemotaxis
  • ibidi µ-Slide Chemotaxis中,細(xì)胞會遷移,并且可以在連接兩個大型儲存器的中央通道中觀察到  

  • 具有長期穩(wěn)定性的明確線性梯度 

  • 實驗起點的細(xì)胞分布均勻 

  • 非常適合使用倒置顯微鏡進(jìn)行活細(xì)胞成像  

  • 適用于:

- 2D 和 3D 檢測 - 快速和慢速遷移細(xì)胞 - 粘附和非粘附細(xì)胞

使用 µ-Slide Chemotaxis,可以在 3D 凝膠基質(zhì)或 2D 表面上培養(yǎng)細(xì)胞。本示例展示了凝膠基質(zhì)中遷移細(xì)胞的 3D 實驗。

μ-Slide Chemotaxis是為研究快速或緩慢遷移、非粘附或粘附細(xì)胞在 2D 表面或 3D 凝膠基質(zhì)上的趨化行為而開發(fā)的。可以觀察到 48 小時以上線性和穩(wěn)定濃度分布中的細(xì)胞遷移。由于梯度快速建立,因此還可以測量快速遷移響應(yīng)(發(fā)生在 30 分鐘內(nèi))。

使用µ-Slide Chemotaxis可以對各種細(xì)胞類型(例如內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞)的遷移行為進(jìn)行詳細(xì)而明確的分析。

參考:

Zengel P, et al. (2011) μ-Slide Chemotaxis: a new chamber for long-term chemotaxis studies. BMC Cell Biol 12:21. 10.1186/1471-2121-12-21.
 

Biswenger V, et al. (2018) Characterization of EGF-guided MDA-MB-231 cell chemotaxis in vitro using a physiological and highly sensitive assay system. PLoS One 13(9):e0203040. 10.1371/journal.pone.0203040.

傳統(tǒng)Boyden 室 | Transwell 遷移試驗存在不足
  • 細(xì)胞從過濾器或多孔膜的一側(cè)遷移到另一側(cè),也稱為跨孔細(xì)胞遷移試驗 

  • 終點法分析:在進(jìn)行跨孔遷移分析時,遷移細(xì)胞在膜背面計數(shù),因此無法分析細(xì)胞路徑 

  • 陡坡 

  • 實驗起點處的細(xì)胞分布不均勻;細(xì)胞僅位于膜的一側(cè)

 

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