近期，又一款眼科基因治療的新型藥物HG004獲得美國FDA授予的孤兒藥資格認定，用于治療由RPE65突變引起的遺傳性視網(wǎng)膜疾病。HG004注射液利用重組AAV載體遞送，在研發(fā)過程中，還使用到了Rpe65的基因敲除小鼠以模擬疾病患者的視網(wǎng)膜表型和功能。

出于眼睛的獨特結(jié)構(gòu)，眼科疾病已成為基因治療的理想適應癥，隨著該療法日漸興起，臨床前對應的小鼠模型需求也日趨旺盛。在基因同源性方面，小鼠基因組與人類相似度近90%；在眼睛結(jié)構(gòu)方面，小鼠的視錐細胞與視桿細胞數(shù)目比也與人類接近，因此，建立合適的小鼠模型已成為當前多數(shù)基因治療研究人員的不二選擇。
 

眼科疾病模型推薦

針對先天性黑蒙癥、進行性黃斑變性、視網(wǎng)膜色素變性、視網(wǎng)膜變性等眼科疾病，賽業(yè)生物開發(fā)了一系列基因編輯和人源化小鼠模型；針對研究人員的需求，也可定制或合作開發(fā)基因編輯小鼠模型，如基因敲除、基因敲入、點突變、人源化小鼠模型及大小鼠手術(shù)疾病模型，加速藥效學驗證實驗的開展。

驗證數(shù)據(jù)——以TG-VEGFA小鼠為例

這款自研的TG-VEGFA小鼠，是賽業(yè)生物建立的牛視桿細胞特異性啟動子驅(qū)動人源VEGFA基因CDS序列表達的模型，以獲得能在視網(wǎng)膜特異性過表達人源VEGFA基因的轉(zhuǎn)基因小鼠。

人源和鼠源VEGFA基因表達水平檢測
利用qPCR檢測小鼠體內(nèi)人源VEGFA和鼠源VEGFA基因表達，結(jié)果顯示相比野生型小鼠，TG-VEGFA小鼠能高表達人源VEGFA，且鼠源VEGFA基因的表達量與野生型小鼠相當。表明該小鼠在過表達人源VEGFA的同時不會影響本底鼠源VEGFA的表達。

TG-VEGFA小鼠和C57BL/6J野生型小鼠中人源VEGFA和鼠源VEGFA基因表達的檢測

視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描（OCT）檢測
通過視網(wǎng)膜光學相干斷層掃描（OCT）對小鼠的視網(wǎng)膜形態(tài)進行檢測，結(jié)果顯示與野生型相比，TG-VEGFA小鼠的脈絡膜區(qū)域的結(jié)構(gòu)存在結(jié)構(gòu)紊亂。

6周齡TG-VEGFA小鼠和C57BL/6J野生型小鼠的眼底和視網(wǎng)膜形態(tài)檢測

F0代小鼠眼底熒光血管造影（FFA）
通過FFA對小鼠的眼部血管進行造影觀察，結(jié)果顯示與野生型相比，TG-VEGFA F0代小鼠的眼底出現(xiàn)血管病變，表現(xiàn)為大面積熒光素鈉滲漏。

6周齡TG-VEGFA F0代小鼠和C57BL/6J野生型小鼠的眼底熒光血管造影（FFA）結(jié)果

F1代和F2代小鼠眼底熒光血管造影（FFA）
通過FFA對F1代和F2代的TG-VEGFA小鼠眼部血管進行造影觀察，結(jié)果顯示F1代和F2代小鼠均能復現(xiàn)F0代小鼠的表型，表現(xiàn)為大面積熒光素鈉滲漏的血管病變表型。

F1代和F2代TG-VEGFA小鼠眼底熒光血管造影（FFA）結(jié)果

視網(wǎng)膜電圖（ERG）檢查
視網(wǎng)膜電圖（ERG）的檢測結(jié)果顯示TG-VEGFA小鼠（hVEGFA）的視網(wǎng)膜電位與野生型小鼠（WT）暫無顯著差異。

TG-VEGFA小鼠和野生型小鼠的視網(wǎng)膜電圖（ERG）檢測的結(jié)果

視網(wǎng)膜HE染色
通過HE染色對小鼠視網(wǎng)膜進行檢測，檢測結(jié)果顯示與野生型（C57BL/6J）相比，TG-VEGFA小鼠的視網(wǎng)膜區(qū)域存在血管增生的病理性表型。
 

TG-VEGFA小鼠和野生型小鼠眼部HE染色結(jié)果

視網(wǎng)膜和脈絡膜isolectin GS-lB4免疫染色
通過lB4染色對小鼠視網(wǎng)膜和脈絡膜進行檢測，檢測結(jié)果顯示與野生型相比，TG-VEGFA小鼠的視網(wǎng)膜存在血管的異常增生，且結(jié)構(gòu)紊亂，同時脈絡膜區(qū)域也觀察到有異常增生的情況。
 

TG-VEGFA小鼠和野生型小鼠眼部視網(wǎng)膜和脈絡膜Isolectin GS-lB4免疫染色結(jié)果

阿柏西普（Aflibercept）藥效驗證
眼底熒光血管造影（FFA）的結(jié)果顯示，阿柏西普給藥前TG-VEGFA小鼠的眼底存在明顯的血管病變和大面積熒光素鈉滲漏。在阿柏西普給藥后，與PBS對照組相比，阿柏西普組中TG-VEGFA小鼠眼部血管病變顯著減輕，血管滲漏面積顯著減小。
 

TG-VEGFA小鼠用于VEGF靶向藥物阿柏西普（Aflibercept）的藥效驗證