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干貨分享之PCR耗材如何選擇?

瀏覽次數:1615 發布日期:2023-3-30  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
導讀
耗材的選擇對得到滿意的PCR實驗結果至關重要,在分析PCR結果時,我們往往側重于對引物、酶的濃度、溫度和時間的分析,卻忽略了PCR耗材也是影響因素之一。PCR耗材類型眾多,如何選擇合適的PCR耗材呢?下面幾個問題可以幫你找到答案。

1.PCR耗材一般選擇什么材質?
不管是普通的PCR還是實時熒光定量PCR(qPCR),通常其耗材會與試劑或樣品直接接觸,因而在生產制備過程中要求選用高質量的材料和良好的加工工藝。一般耗材都是選擇聚丙烯(PP)材質。聚丙烯(PP)材質是生物學惰性材料,表面不易于粘附生物分子,且有著良好的化學耐性,及溫度耐受性。

2.不同體積的PCR管/板,該怎么選?
PCR 管/板常見的體積:
• 單管/8連管/12連管:0.5mL、0.2mL、0.1mL
• 96孔板:0.2mL、0.1mL
• 384孔板:0.02mL
PCR 管/板的規格:
依據具體的實驗要求選用合適的產品。PCR 管的體積大多數都可以滿足 PCR 反應的要求。容量規格有標準容量和低容量可選,一般情況下推薦優先選用低容管。因為低容反應管/板有著較小的上方空間,可提高熱傳導率并降低蒸發。同時,在加樣時需要避免加樣過量或過少。過量會導致熱傳導率下降,溢出及交叉污染,而過少可能會造成樣品蒸發損失。

3.單管或8聯管的平蓋/凸蓋有什么區別?
當樣品量較少時,都會優先選用單管或者8聯管。但是當反應體積需求較大時,單管占優勢,體積可達 0.5 mL。單管和8聯管有平蓋和凸蓋兩種,各有優點。平蓋可為qPCR提供精確的熒光信號傳遞;便于書寫標記。凸蓋與PCR儀蓋接觸,減少壓力引起的管變形等;但會影響熒光信號傳遞,無法應用于qPCR實驗。
 

4.不同的96孔板使用場景有什么不同?
96孔板一般分為無裙邊板、半裙邊板和全裙邊板。
無裙邊板:可適用于大多數的 PCR 儀或 qPCR 儀,但不適用于自動化應用。移液過程中穩定性不高,需要配合板托使用。
半裙邊板:可適配標簽或應用條碼,及自動化應用,且有著較好的移液穩定性。
全裙邊板:非常適用于自動化實驗應用,也可適配標簽及應用條碼。機械強度較好,可適用于凸出模塊的 PCR 儀,且移液過程中穩定性高。

5.PCR板/管材質是厚點的穩定性更好嗎?
不是的。PCR耗材的管壁厚度要均一,才能提供一致的熱傳導。超薄管壁較標準版薄50%,可進一步減少熱屏障,帶來更快更好的反應效果。

6.為何96 孔和 384 孔板切角和標識不相同?
切角:PCR 板的切角位置選擇取決于適配儀器要求,便于定位。
標識:PCR 板的數字字母標記有助于識別單個孔及樣品位置。一般為凸出的顏色數字標識或者印刻標識。對于一些自動化應用實驗,印刻標記的反應板密封性會更好。

7.PCR 板孔有凸出的,有平的,如何選?
常見的 PCR 板有平孔緣和加高孔緣兩種。平孔緣的反應板,可適用于大多數的 PCR 儀。升孔緣的反應板,便于封膜,可降低樣品間的交叉污染風險。
 

8.不同顏色的PCR管/板,該怎么選?
對于普通的PCR反應選用透明的就可以。在實時PCR反應時,白管的靈敏度和一致性相對更高。白色管壁能夠阻止熒光穿過管壁和折射,進而防止熒光傳至加熱模塊,被模塊吸收或發生不一致反射等情況。相比于透明管,在白管的頂端能夠采集到更強,更聚焦的熒光信號。
發布者:蘇州亞通生物醫療科技有限公司
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