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HPLC-MS/MS法在檢測大鼠乳腺微透析液中環磷酰胺濃度的應用

瀏覽次數:1293 發布日期:2022-8-31  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

環磷酰胺(Cyclophosphamide)是臨床上最常用的一種烷化劑類抗腫瘤藥,廣泛用于治療惡性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌等,具有一定的化療效果。環磷酰胺是一個典型的前體藥物,體外無活性,在肝中被細胞色素P450氧化酶氧化,生成活化型的磷酞胺氮芥發揮抗腫瘤作用,屬細胞周期非特異性藥物。目前,國內環磷酰胺血漿濃度的測定方法主要是GC法和 HPLC法,但耗時較長,檢測限偏高。此外,血藥濃度結果不能準確反映靶標部位的治療情況。微透析技術是近年發展起來的一種新型活體靶標取樣技術。本研究旨在建立HPLC-MS法測定大鼠乳腺微透析液中環磷酰胺的濃度。

微透析技術可監測靶部位組織細胞外的游離藥物濃度,因此,監測組織中藥物的濃度比傳統血藥濃度的定量結果更具預測性。本次實驗微透析系統包括CMA150型動物保溫墊、CMA402型微量注射泵、MAB85型低溫樣品收集器、CMA30型線性微透析探針(分子截留值6KU,透析膜長1CM),均購自美國CMA公司。

微透析樣品收集及處理

1、探針體外校正 

以林格氏液沖洗探針后,將線性微透析探針浸入裝有100ml林格氏液的微透析反應瓶中,分別以不用濃度的藥物(cin,1.0、0.4、0.8μg/ml)作為灌流液,其他條件不變,收集的樣品在所建立的HPLC-MS/MS條件下測定透析液中藥物濃度。通過減量法計算環磷酰胺的體外探針回收率,R=(cin-cout)/cin,結果為(53.32±1.23)%。

2、微透析樣品收集 

大鼠用水合氯醛按體重(0.4ml/100g,ip)麻醉,腹部朝上固定于保溫墊上,使其體溫保持在37.5℃。用脫毛膏去除胸部毛,15min后,暴露大鼠乳頭,用直尺準確量取探針透析膜進出的長度。將線性微透析探針用18G 穿刺針引導平行植入乳腺組織后,抽回引導針并將探針留于組織中,然后將探針與微透析裝置相連。以2μl/ml的流速向其中泵入林格氏液作為灌流液,排除氣泡并沖洗管路30min,再以1.0μl/ml的流速向微透析探針中泵入林格氏液,平衡1h后,收集空白透析液。將注射用環磷酰胺用生理鹽水溶解,尾靜脈注射給藥,一次性給予0.20mg/g。以冷凍樣品收集器連續收集透析液,采樣間隔30min,溫度4℃,持續采樣2h。

3、樣品處理

精密量取透析液樣品20μl,加入內標溶液10μl,渦旋10s,進樣2μl。

圖1 HPLC-MS/MS法測定大鼠乳腺微透析液中環磷酰胺和內標安替比林的典型譜圖

A:空白透析液;B:空白透析液+環磷酰胺對照品(0.1μg/ml)+內標安替比林(1.0μg/ml);C:微透析液樣品;A1、B1、C1:環磷酰胺;A2、B2、C2:安替比林

微透析樣品中環磷酰胺的精密度和準確度實驗結果

文獻報道,環磷酰胺普遍應用于乳腺癌聯合治療方案中,在乳腺癌化療過程中占據著不可忽視的地位。因此,本研究采用HPLC-MS/MS法檢測乳腺微透析液中環磷酰胺的藥物濃度,方法專屬性強,檢測限低,檢測時間短,可在8min內快速檢測出乳腺中環磷酰胺的藥物濃度,提供了一種快速有效監測環磷酰胺藥物濃度的方法

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