文中闡述了采用化學合成的修飾modified message RNA （modRNA）技術對hADSCs進行基因修飾，促使其高效表達血管內皮生長因子A（VEGFA）和堿性成纖維細胞生長因子（bFGF），這兩種因子在血管生成和抗凋亡中發揮重要作用。結果證實經VEGFA和bFGF mRNA增強的hADSCs可促進穩定血管的再生以及抑制細胞凋亡，改善心臟傳導紊亂并提高心功能，為心肌梗死的治療提供新的方向。

研究方法：
文中采用電標測系統（Electrical Mapping）檢測MI后15分鐘和4周的左心室電傳導的變化。分析傳導時間（CT）、傳導速度（CV）和非均勻性指數，評估正常組、心肌梗死手術組及治療干預組電整合能力及干預效果。

研究結果：
1. 在hADSCs中高效轉染modRNA
研究通過GFP報告基因驗證修飾信使RNA（modRNA）在人脂肪來源干細胞（hADSCs）中的轉染效率，結果顯示轉染24小時后效率達82.93%，且GFP表達持續至少5天，同時未顯著影響細胞活力。進一步實驗表明，轉染VEGFA和bFGF modRNAs的hADSCs在前2天快速分泌目標蛋白，并持續表達超過5天，但第7天時表達顯著減少。ELISA檢測證實，轉染組的蛋白分泌水平在所有時間點均顯著高于對照組。結果表明，modRNA能夠高效轉染hADSCs并快速穩定表達目標蛋白。
 

圖1. modRNA在hADSCs中的轉染效率

2. modRNA修飾的hADSCs分泌蛋白的體外功能
研究評估VEGFA和bFGF modRNA轉染對人臍靜脈內皮細胞（HUVECs）管形成和遷移能力的影響。結果顯示，轉染VEGFA或bFGF modRNA的hADSCs顯著促進HUVECs管狀結構形成和遷移，且雙基因轉染組（hADSCsdual）效果最佳。此外，在缺氧條件下，轉染VEGFA或bFGF modRNA顯著抑制H9C2細胞凋亡，其中bFGF modRNA的抑制作用更強。同時，轉染組條件培養基顯著促進平滑肌細胞（SMCs）增殖，hADSCsdual組效果最為顯著。

圖2. modRNA轉染的hADSCs的體外生物學功能

3. hADSCsdual在體內改善MI后的心臟功能
研究評估modRNA轉染的hADSCs在MI治療中的潛力。實驗顯示，MI后大鼠心臟功能顯著下降，而hADSCs移植后主要分布于心臟，且未引起明顯病理改變，表明其安全性良好。ELISA檢測發現，hADSCsdual組在移植后72小時內VEGFA和bFGF蛋白表達顯著高于MI組。超聲心動圖結果顯示，MI后2周和4周，hADSCsVEGFA組和hADSCsdual組的心臟功能顯著改善，其中hADSCsdual組效果最佳，LVEF和LVFS顯著提升。研究表明，modRNA修飾的hADSCs，尤其是hADSCsdual，在改善MI后心臟功能障礙方面具有顯著治療潛力。

圖3. hADSCs移植后心臟功能的恢復

4. hADSCsdual在體內促進MI后左心室電傳導
研究評估MI手術及治療干預后左心室電傳導的變化。結果顯示，MI后15分鐘和4周時，MI組的電傳導紊亂，電活動離散度顯著增加。到第四周時，接受hADSCsVEGFA、hADSCsbFGF或hADSCsdual治療的大鼠電傳導更有序，電活動離散度降低。定量分析表明，MI后傳導時間（CT）延長，傳導速度（CV）降低，傳導離散度增加；而治療后CT縮短，CV增加，傳導離散度降低。hADSCsdual組的左心室傳導參數改善最顯著，表明其作為一種新治療方法在改善左心室電傳導方面具有治療潛力。

圖4. hADSCs移植后左心室電傳導功能的恢復

5. hADSCs^dual減少心臟纖維化并保留心室壁厚度建模4周后，HE和Masson染色顯示，hADSCs^dual組大鼠心臟再生組織比例增加，左心室瘢痕面積顯著減小，心室壁厚度保持良好。Vimentin染色表明，hADSCs^dual組梗死區浸潤性成纖維細胞數量較少。結果表明，hADSCs^dual減少心臟纖維化，緩解心室重構，并抑制MI引起的心肌損傷進展。

圖5. MI及治療后大鼠心室形態學分析

6. hADSCs^dual減少梗死區細胞凋亡并促進細胞增殖
研究hADSCs 體內植入效果，發現多數聚集在梗死區及邊緣區，預處理VEGFA和/或bFGF modRNA的hADSCs在梗死區的存活率顯著更高。TUNEL染色顯示，hADSCs^dual組凋亡細胞比例顯著低于hADSCs^Luc組。Ki-67染色證實，hADSCs^dual顯著促進梗死區細胞增殖。免疫染色發現，少量細胞共表達cTnT和Ki-67，但具體細胞類型難以確定。

圖6. MI及hADSCs移植后梗死區的細胞凋亡與增殖