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核酸脂質納米粒解析——氮磷比計算

瀏覽次數:1945 發布日期:2021-7-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
​在使用帶電荷的原料進行納米粒子合成時,正電荷與負電荷的數量比將影響到納米粒子的穩定性、電位等性能。而在核酸脂質納米粒中,正電荷通常為具有可電離銨根(N)的陽離子脂質,而負電荷則為帶有大量磷酸根(P)的核酸分子,兩者可通過靜電吸附的方式結合在一起。因此,不合理的比例可能會導致粒徑過大、穩定性差等缺陷,正確計算正電荷與負電荷的比——N/P比——就顯得尤為重要。
 
作為計算舉例,我們挑選一個常見的配方,計算的關鍵數值如下:
  •  陽離子脂質濃度(即N的濃度):6.25 mmol/L

  • 有機相體積(含陽離子脂質):1 mL

  • 核酸濃度:0.17 mg/mL

  • 水相體積(含核酸):3 mL

  •  堿基的平均分子量:330 g/mol

其中堿基的平均摩爾濃度為經驗的平均值,如果使用的核酸序列已知,則能夠計算得到精確的摩爾濃度。
 

在以上條件下,N的物質的量為:

而P的物質的量為:


因此N/P比為:


以上即為N/P比的計算過程,不過在實際應用當中,也可以先定下N/P比,再確定有機相或水相的濃度,此時只需要逆向計算即可。例如我們將N/P比改為6:1,在其他濃度不變的情況下,核酸的濃度就需要降到原有的2/3,即0.113 mg/mL。

細心的讀者可能也發現了,在計算的過程中并沒有明確的核酸長度,這是因為核酸的長度并不會影響使用到的質量濃度。以單鏈RNA和上方計算得到的數值為例,在保持N/P比和N的物質的量不變的情況下,所需的P的物質的量也固定為1.545×10
-6mol,而核酸的質量濃度與P的物質的量關系為:



n核酸為核酸的物質的量(摩爾數),M核酸為核酸的摩爾質量對于1000 nt的mRNA,一個mRNA分子就有1000個陰離子;而對于2000 nt的mRNA來說,一個mRNA分子則有2000個陰離子,所需的物質的量(摩爾數)只需1000 nt的一半,但相對應的,其核酸的摩爾質量則會提升一倍(不考慮不同堿基的重量差異)。所以兩者相乘,最終的數值并沒有變化。因此,在使用mRNA的時候,換算成質量濃度對于計算更為方便。

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應用范圍:


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