成年大小鼠心肌細胞分離操作方法的技術改進歷程匯總
近年來，隨著心臟電生理研究的不斷深入和細胞分子生物學在心血管研究領域的不斷普及，成年大小鼠心肌細胞已廣泛用于成熟心肌細胞離子通道、蛋白免疫化學、心肌病及心肌梗塞等模型的實驗研究中。成熟心肌細胞不僅在結構和功能上更接近在體細胞，并且成熟心肌細胞的體外培養(yǎng)模型可以排除成纖維細胞對實驗結果的干擾。
心臟由心肌細胞和間質細胞組成。心肌細胞占心臟總體積的75%,但細胞數(shù)僅占心臟細胞總數(shù)的1/3。出生后心肌細胞喪失增值能力，是高度分化的終末細胞，主司收縮功能。間質細胞由成纖維細胞、血管平滑肌細胞、神經(jīng)細胞及巨噬細胞等組成。成纖維細胞占間質細胞90%以上，成纖維細胞具有分泌功能，合成和分泌生物活性物質，調節(jié)自身膠原的產(chǎn)生及周圍心肌細胞的形態(tài)結構和生理功能。
心肌細胞按生理功能分為兩類:一類為工作細胞,包括心房肌及心室肌,胞漿內含有大量肌原纖維,因而具有收縮功能,主要起機械收縮作用。除此以外,還具有興奮性、傳導性而無自律性。另一類為特殊分化的心肌細胞,包括分布在竇房結、房間束與結間束、房室交界、房室束和普肯耶纖維中的一些特殊分化的心肌細胞,胞漿中沒有或很少有肌原纖維,因而無收縮功能,主要具有自律性,有自動產(chǎn)生節(jié)律的能力,同時具有興奮性、傳導性。無論工作細胞還是自律細胞,其電生理特性都與細胞上的離子通道活動有關,跨膜離子流決定靜息膜電位和動作電位的形成。
1969年Kono和Powell等先后應用酶解法對成年大鼠心肌細胞進行分離，1977年Jacobson成功進行了成年大鼠心肌細胞的培養(yǎng)。龍西林等于1991年率先在國內分離出成年大鼠心肌細胞。成年大小鼠心肌細胞的分離與培養(yǎng)難度較大，酶解法用于成年鼠心肌細胞的分離已有近五十年的歷史，但至今仍無統(tǒng)一方法可循。目前對于成年鼠心肌細胞的研究主要集中于大鼠心肌細胞，小鼠心肌細胞的分離與培養(yǎng)難度更高。隨著轉基因技術的興起，以及siRNA與microRNA等方面調控研究的不斷深入，對于體外分離的成年鼠心肌細胞的活性和成活率有了更高要求，這也對成年大小鼠心肌細胞分離和培養(yǎng)提出更高要求。齊氏生物在總結前人方法的基礎上，應用改良的Langendolf方法進行心臟多次灌流，分離得到的大小鼠心肌細胞純度高，成活率高，可用于心血管疾病發(fā)生發(fā)展研究以及心血管藥物的研究及多種生理生化實驗的要求。
文章鏈接：http://www.chiscientific.cn/wenxiandetail.aspx?ID=292
圖1.心臟結構圖
心臟由心肌細胞和間質細胞組成。心肌細胞占心臟總體積的75%,但細胞數(shù)僅占心臟細胞總數(shù)的1/3。出生后心肌細胞喪失增值能力，是高度分化的終末細胞，主司收縮功能。間質細胞由成纖維細胞、血管平滑肌細胞、神經(jīng)細胞及巨噬細胞等組成。成纖維細胞占間質細胞90%以上，成纖維細胞具有分泌功能，合成和分泌生物活性物質，調節(jié)自身膠原的產(chǎn)生及周圍心肌細胞的形態(tài)結構和生理功能。
圖2.心臟細胞組成
心肌細胞按生理功能分為兩類:一類為工作細胞,包括心房肌及心室肌,胞漿內含有大量肌原纖維,因而具有收縮功能,主要起機械收縮作用。除此以外,還具有興奮性、傳導性而無自律性。另一類為特殊分化的心肌細胞,包括分布在竇房結、房間束與結間束、房室交界、房室束和普肯耶纖維中的一些特殊分化的心肌細胞,胞漿中沒有或很少有肌原纖維,因而無收縮功能,主要具有自律性,有自動產(chǎn)生節(jié)律的能力,同時具有興奮性、傳導性。無論工作細胞還是自律細胞,其電生理特性都與細胞上的離子通道活動有關,跨膜離子流決定靜息膜電位和動作電位的形成。
圖3成年大鼠心肌細胞（來源：齊氏生物）
1969年Kono和Powell等先后應用酶解法對成年大鼠心肌細胞進行分離，1977年Jacobson成功進行了成年大鼠心肌細胞的培養(yǎng)。龍西林等于1991年率先在國內分離出成年大鼠心肌細胞。成年大小鼠心肌細胞的分離與培養(yǎng)難度較大，酶解法用于成年鼠心肌細胞的分離已有近五十年的歷史，但至今仍無統(tǒng)一方法可循。目前對于成年鼠心肌細胞的研究主要集中于大鼠心肌細胞，小鼠心肌細胞的分離與培養(yǎng)難度更高。隨著轉基因技術的興起，以及siRNA與microRNA等方面調控研究的不斷深入，對于體外分離的成年鼠心肌細胞的活性和成活率有了更高要求，這也對成年大小鼠心肌細胞分離和培養(yǎng)提出更高要求。齊氏生物在總結前人方法的基礎上，應用改良的Langendolf方法進行心臟多次灌流，分離得到的大小鼠心肌細胞純度高，成活率高，可用于心血管疾病發(fā)生發(fā)展研究以及心血管藥物的研究及多種生理生化實驗的要求。
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