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Cell-Based ELISA簡介以及應用

瀏覽次數:2819 發布日期:2014-9-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
1、Cell-Based ELISA 的優點:
Cell-Based ELISA(基于細胞的 ELISA)是一種全新的ELISA技術,有兩個最突出的優點:
 
1.1不需要抽提蛋白、包被微孔板:細胞直接在微孔板里培養,待檢測的時候,將細胞固定在微孔板上并進行通透處理即可。這樣就避免了抽提蛋白時,由于客觀和主觀上引起樣品的損失而導致實驗結果在一定程度上偏離了實際情況。同時不用包被微孔板,簡化了實驗流程,有助于提高效率。科研人員在一個 96 孔酶聯板上,便能檢測目標細胞蛋白經刺激或抑制作用后的表現。由于省去抽提蛋白和裂解細胞的步驟,樣本的損失也能降到最低,比起其他普通的 ELISA 測定方法,這項全新的 ELISA 技術能更快速、更方便地一次檢測大量的細胞內蛋白。
 
1.2  可同時檢測兩種不同蛋白:封閉后加入兩種抗不同蛋白且來源于不同宿主的一抗,然后再加入不同的二抗,加入兩種熒光底物,檢測兩個波長。同時檢測兩種蛋白的好處是顯而易見的,可以減少工作量,此外還可以滿足一些特殊的實驗需要,例如,需要測定某個蛋白的磷酸化比例,就需要測定磷酸化蛋白的數量和總蛋白的數量,這兩個測定在同一次實驗進行,有助于消除實驗誤差,得到更為精確的實驗結果。
 
2、Cell-Based ELISA 的兩種技術:
某些公司發展了雙通道Cell-Based ELISA技術;
雙通道與單通道Cell-based ELISA比較:
雙通道cell-based ELISA,顧名思義,即一次可以同時檢測兩種目的蛋白,R&D Systems提供的Cell-based ELISA就是雙通道cell-based ELISA,原理略:(需要熒光檢測方式和相應儀器);
 
單通道cell-based ELISA,即一次只能檢測一種目的蛋白,他和普通ELISA的主要區別在于樣品處理過程:
 

3、cell-based ELISA 的應用:

該產品,最多發展起來的是用于檢測磷酸化和非磷酸化蛋白的相對含量;

4、有cell-based ELISA產品的公司:

目前,多家elisa 產品提供商均提供cell based elisa 試劑盒,如Rnd systems, raybiotech, ebioscience, millipore 等公司;

 

5、如何自己進行cell based elisa 實驗?
事實上,根據單通道的cell based elisa 原理,可以自己建立cell based elisa 實驗系統;
細胞加入培養板中;
加入刺激物或者抑制劑進行培養;
對細胞進行固定或者封閉;
加入第一抗體;
加入HRP 結合的二抗(二抗的選擇,同western blot);
加入底物進行顯色。
發布者:BioTNT(冠泰生物)
聯系電話:021-51692391
E-mail:sales@biotnt.com

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