1. 處死動物，分離下頜骨，自中縫處將其分為兩半。

2. 打開髓腔，取出牙髓，去除頂端的apical button，在培養(yǎng)皿中用顯微剪剪碎，注意冰上操作。

3. 將牙髓轉(zhuǎn)入15ml離心管中，終濃度1.5mg/ml的Collagenase I于37℃，5% CO2條件下消化40min。

4. 加入完全培養(yǎng)基（MEM+10%FBS+1%雙抗）終止消化，4℃，360g離心10min收集沉淀。

5. PBS清洗一遍，離心收集沉淀，完全培養(yǎng)基重懸，過篩后鋪板。

干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞,它包括胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。目前已經(jīng)成功分離培養(yǎng)包括來自骨髓、肌肉、神經(jīng)、上皮等組織的成體干細(xì)胞。牙髓干細(xì)胞是位于牙髓組織的一種成體干細(xì)胞。2000年,Gornhtos等首先成功地分離培養(yǎng)出人牙髓干細(xì)胞,為干細(xì)胞的研究開辟了一個新的領(lǐng)域。牙髓干細(xì)胞具有同其他成體干細(xì)胞相似的生物學(xué)特性,具有較強的克隆形成能力,可以分化為牙髓組織中的終末功能細(xì)胞并具有一定的橫向分化能力。目前國內(nèi)外只有人牙髓干細(xì)胞培養(yǎng)成功的報道,鼠牙髓干細(xì)胞的相關(guān)研究國內(nèi)外還未見報道,而鼠是實驗研究最常用的模型,它具有取材容易、與人同源性較高等優(yōu)點。

大鼠牙髓干細(xì)胞特性

1)組織來源于實驗動物的正常牙組織。

2)細(xì)胞鑒定:STRO-1免疫熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長方式:長梭形,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。

大鼠牙髓干細(xì)胞產(chǎn)品的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
 

溫馨提醒:

1、可將培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中,備用;細(xì)胞*傳代時,可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用,讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

2、確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好后,應(yīng)及時將部分細(xì)胞凍存,再進(jìn)行后續(xù)的實驗,避免后期實驗失誤可能發(fā)生細(xì)胞污染或死亡而導(dǎo)致的細(xì)胞丟失,影響后續(xù)實驗。

 

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