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對話科學家:膜電阻測量的FAQs

瀏覽次數:3458 發布日期:2015-5-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

EVOM2是WPI全球專利產品,是最新一代用于特異性完成組織培養研究中TEER測量的電阻儀。它不僅可以定性地測量單層貼壁細胞的健康狀態,而且也能定量地測量單層細胞的融合情況,可用于上皮細胞、胃腸道和呼吸道黏膜細胞、血管上皮細胞及血腦屏障等培養過程中細胞生長狀態的評價以及藥效動力學評價。

獨特的EVOM2電路設計和STX2電極的完美結合,讓其可以監測單層細胞的融合狀態,當與WPI公司設計的EndOhm小室結合使用時,它也可以用來完成更加精確的定量測量或更低電阻的測量,如血腦屏障(BBB)內皮生長電阻測量。

下面,我們就大家常見的幾個問題進行詳細的解答。

 

1EVOM2的工作原理是什么?

EVOM2 的工作原理是通過主機產生一個10 μA的恒定跨膜電流,同時以一定的頻率反轉電極的極性,這樣電極和膜都沒有電荷累積,通過STX2 的兩個電流電極(I1I2)使10 μA 的電流跨過細胞膜,另一對電極(V1V2)測量要求達到10 μA電流所需要的電壓,并將信息發送給處理器。處理器根據歐姆定律將其轉化為歐姆,在讀數表上顯示數字。因為電流是固定的10 μA,因此,很容易就轉化出測量結果。如在膜電阻為1000 Ω時,10 μA電流通過的電壓應該是10 mV;在200 Ω膜電阻時,10 μA的電流將產生2 mV的電壓;不論何種情況,在膜或電極上所消耗的能量都非常小。

 

2、什么是EndOhm小室?它與STX2電極有什么不同?

Endohm作為EVOM2可選電極室,可用來測量低電阻培養細胞或者高精度測量。EndohmEVOM2一起使用是目前市場上最精確、最經濟的一組內皮細胞電阻儀。

小室和蓋子每一個都包含一對同中心電極:在中心有一個電壓敏感性的銀/氯化銀半電極,外加一個環狀的電流電極,電極上部的高度可以調節以便適應不同廠家生產的培養杯。對稱的圓形盤狀電極放置于膜的上部和下部,使其比STX2有更加均一的電流密度跨過膜兩側,大大提高了測量的穩定性和可重復性。與STX2最大的不同是培養皿必須從培養板轉運至Endohm進行測量,Endohm小室對滲漏組織測量提供了更加方便和經濟的解決方案。

 

3、怎樣進行電極的預處理?

測量電阻時:不需要進行任何預處理,可以直接從干儲存環境中取出使用。

測量電壓時:電極使用前則需要平衡。為了確保電壓穩定性和較低的電極間電勢差,關閉EVOM2電源(O),并且在電極連接到EVOM2時,將電極浸入到點解液中(0.10.15M KCl)。當STX2 電壓電極連接到設備且關閉電源時,在內部會形成短路。當電壓電極回路短路幾小時后,電極間的不對稱電勢差就會減小,內部電極直流電勢差只有幾毫伏甚至更少,同時十分穩定。在干燥環境中,平衡電極需要24小時;在溶液中,平衡電極需要2小時。

 

4、怎么清理我的電極?

1)清潔STX2電極表面

在使用中,電極表面可能被蛋白質或其他物質覆蓋。這種堆積或污染,會導致系統效率的降低,引起10-20mV電壓誤差,或者讀數不穩(電阻測量不受影響)。如果需要解決這個問題,可以按以下步驟重新氯化電極或者清潔電極表面。

重新氯化:將電極浸入未經稀釋的家用漂白水3分鐘,浸泡后用清水立即沖洗,盡管這將重新氯化電極表面,但是不能糾正誤差。(注意事項:確保只有電極尖端置于漂白液中,不能將漂白液接觸電極上部。)

電極表面拋光:600級砂紙輕輕打磨STX2的電壓電極頂端內側的銀質小球(9),輕輕除去銀質小球的表層即可。(注意事項:多次重復打磨最終會除去所有的 Ag/AgCl 小球,如果打磨不再改善電壓讀數時,則需要更換電極。若沒有600級砂紙,可用橡皮擦代替。)

2)對STX2電極消毒

STX2 電極是未經消毒的。可以用酒精、環氧乙烷、紫外線或者殺菌劑消毒,不可以用用高壓滅菌器消毒。(注意事項:電極每次在酒精中的浸泡時間不能超過30分鐘。在酒精里長時間的浸泡,會破壞電極表面的保護層,從而縮短電極使用壽命。)

3)電極存儲

短期存儲(兩周以內):浸泡電極尖端在電解液中。確保電極線纜插頭連接到EVOM2設備,以便保證系統內部短路并且保證電極對稱性。

長期存儲(兩周以上):長期存儲時,電極要用蒸餾水清洗并且放置在干燥、黑暗處。

(注意事項:當電極暴露在強光或者紫外線中時,電極表面會形成一層黑色氧化膜,通常,氧化膜不會影響電極性能,為了避免氧化膜的行成,應該避光儲存。)

 

5EVOM2目前可用于哪些研究領域?

1. 用于研究血腦屏障內皮細胞的藥物和營養物質轉運;

2. 用于CaCo-2大腸癌細胞或其它粘膜或上皮癌細胞的藥效學研究。

3. 用于培養的腸道粘膜細胞的藥物吸收和營養物質轉運研究;


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