1. 處死動物，分離下頜骨，自中縫處將其分為兩半。

2. 打開髓腔，取出牙髓，去除頂端的apical button，在培養(yǎng)皿中用顯微剪剪碎，注意冰上操作。

3. 將牙髓轉入15ml離心管中，終濃度1.5mg/ml的Collagenase I于37℃，5% CO2條件下消化40min。

4. 加入完全培養(yǎng)基（MEM+10%FBS+1%雙抗）終止消化，4℃，360g離心10min收集沉淀。

5. PBS清洗一遍，離心收集沉淀，完全培養(yǎng)基重懸，過篩后鋪板。

干細胞是一類具有自我更新和分化潛能的細胞,它包括胚胎干細胞和成體干細胞。目前已經(jīng)成功分離培養(yǎng)包括來自骨髓、肌肉、神經(jīng)、上皮等組織的成體干細胞。牙髓干細胞是位于牙髓組織的一種成體干細胞。2000年,Gornhtos等首先成功地分離培養(yǎng)出人牙髓干細胞,為干細胞的研究開辟了一個新的領域。牙髓干細胞具有同其他成體干細胞相似的生物學特性,具有較強的克隆形成能力,可以分化為牙髓組織中的終末功能細胞并具有一定的橫向分化能力。目前國內外只有人牙髓干細胞培養(yǎng)成功的報道,鼠牙髓干細胞的相關研究國內外還未見報道,而鼠是實驗研究最常用的模型,它具有取材容易、與人同源性較高等優(yōu)點。

大鼠牙髓干細胞特性

1)組織來源于實驗動物的正常牙組織。

2)細胞鑒定:STRO-1免疫熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)細胞生長方式:長梭形,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。

大鼠牙髓干細胞產(chǎn)品的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
 

溫馨提醒:

1、可將培養(yǎng)瓶內多余的培養(yǎng)基轉移至50ml無菌離心管中,備用;細胞*傳代時,可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用,讓細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。

2、確認細胞狀態(tài)良好后,應及時將部分細胞凍存,再進行后續(xù)的實驗,避免后期實驗失誤可能發(fā)生細胞污染或死亡而導致的細胞丟失,影響后續(xù)實驗。

 

上海昆盟生物科技有限公司 (Coweldgen Scientific Co.,LTD) 是一家專注于生命科學領域提供相關試劑產(chǎn)品和服務的生物高科技企業(yè)。公司提供種類齊全的細胞系、質量穩(wěn)定的細胞培養(yǎng)試劑產(chǎn)品、成熟高效的技術服務、專業(yè)周到的技術支持。