今天，小編跟您聊聊磷酸化蛋白質組鑒定！

  蛋白質翻譯后修飾（PTMs）幾乎參與了細胞所有正常生命活動的過程，并發揮十分重要的調控作用。蛋白修飾已經成為國際上蛋白質研究的一個極其重要的領域，目前研究比較成熟的有磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化等。

  蛋白質磷酸化是生物體中最常見、最重要的一種蛋白質翻譯后修飾方式，它可以通過激發、調節諸多信號通路進而參與調控生物體的生長、發育、逆境應激、疾病發生等多種生命過程，一直是生物學研究的重點與熱點。根據客戶需求，金開瑞蛋白質組平臺可提供磷酸化蛋白質組全譜鑒定、label-free定量技術服務。

  磷酸化蛋白質組全譜鑒定以組織、細胞等較為復雜樣本為研究對象，目的在于鑒定樣品中發生磷酸化的蛋白質以及相應的磷酸化位點。首先對蛋白樣本進行酶解，TiO2或IMAC-Fe或IMAC-Ti富集磷酸化多肽，5600-plus質譜檢測，利用得到的質譜譜圖與相應數據庫搜索比較，從而得到肽段序列結果，同時通過生物信息軟件計算出磷酸化位點。對于磷酸化位點鑒定，為了增加定位修飾位點的準確性，金開瑞采用較流行的Ascore算法對發生在各位點的磷酸化修飾做進一步打分評估，從而正確辨別真實修飾位點。

技術路線：

技術特點：

●富集方法特異性高，對低PH溶液、去垢劑、鹽類、其它低分子污染物有更高的耐受性，容易與非磷酸化肽段分離；

●通量大，一次可以鑒定1000個以上磷酸化位點。

適用范圍：

●已知物種基因組序列、ESTs序列或蛋白質序列全庫；

●無其他特別要求。

經典案例：

題目：Identification of tyrosine-phosphorylated proteins associated with lung cancer metastasis using label-free quantitative analyses.（用Label-free定量技術鑒定肺癌轉移相關的酪氨酸磷酸化蛋白）

期刊：Journal of proteome research

主要技術：Label-free定量技術

文章摘要：酪氨酸磷酸化（P-酪氨酸）蛋白可參與肺癌的侵襲和轉移，但目前已被報道的數量還較少。本文采用Label-free定量技術進行大規模研究酪氨酸磷酸化蛋白及其參與轉移過程的情況，共鑒定到來自276個磷酸化蛋白的335個P-Tyr位點。Label-free定量結果顯示，有36個磷酸化肽在不同酪氨酸磷酸化蛋白侵襲能力的樣品間呈現顯著差異。從這些肽段中提取了兩個新的位點保守序列和4個已知的特定激酶和磷酸化motif序列：EGFR, Src, JAK2和TC-PTP。通過對P-絡氨酸蛋白的蛋白相互作用分析發現，有11個蛋白連接在包含EGFR, c-Src, c-Myc和STAT的互作網絡中，該網絡已被確認與肺癌轉移相關。這11個蛋白中有7個之前未報道，這將提供一個更好的、全面的了解肺癌的侵襲/轉移的機制及治療方法。

圖：新發現的三個motif展示

Wu HY, Tseng VS et al. Identification of tyrosine-phosphorylated proteins associated with lung cancer metastasis using label-free quantitative analyses. Journal of proteome research                  

圖： 表達量發生顯著變化的酪氨酸磷酸化蛋白的網絡互作圖

Wu HY, Tseng VS et al. Identification of tyrosine-phosphorylated proteins associated with lung cancer metastasis using label-free quantitative analyses. Journal of proteome research              

參考文獻：Wu HY, Tseng VS, Chen LC, Chang HY, Chuang IC, Tsay YG, Liao PC: Identification of tyrosine-phosphorylated proteins associated with lung cancer metastasis using label-free quantitative analyses. Journal of proteome research 2010, 9(8): 4102-4112.