非整合型慢病毒——新型基因研究工具

常規慢病毒載體能高效感染分裂細胞和非分裂細胞，將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而實現持久性表達。然而這種隨機整合會帶來插入突變的風險。于是，研究人員也期望用到非整合型的慢病毒包裝系統。

百恩維生物對整合酶蛋白進行突變，推出了整合酶缺陷型的慢病毒包裝系統（非整合型慢病毒）。非整合型慢病毒在目的細胞中產生了環狀附加體，這些載體在分裂細胞中瞬時表達，但在非分裂細胞中穩定表達。與整合型慢病毒相比，非整合型慢病毒導致插入突變的風險大大降低，適合iPS研究、RNA干擾、同源重組等領域。

非整合型慢病毒包裝系統屬于第四代的包裝系統，它將pol基因也分離出來，使gag、pol和env成為三個獨立載體，而不是兩個載體，從而大大降低了產生具有復制能力的病毒的可能性，進一步提高了生物安全性。此系統與其他慢病毒載體配套使用可以制備出高滴度的慢病毒顆粒，無需濃縮即可達到 5x10⁸ IU/ml。之所以能制備高滴度的病毒顆粒，主要有以下三個關鍵因素。

首先，非整合型慢病毒系統中各載體的比例是經過優化的，極大地提高了病毒包裝所需蛋白的表達量。其次，引入了Tet-Off轉錄激活子(tTA)，形成病毒包裝蛋白的級聯放大表達效應，極大地提高了病毒包裝蛋白的表達量。第三，百恩維生物擁有轉染效率高極高的轉染試劑，可以高效地轉染Lenti-X 293T包裝細胞系，制備出高滴度的慢病毒顆粒。本系統可以與任何慢病毒表達載體相兼容。

非整合型慢病毒主要優點：

• 高效的基因轉導，不會插入宿主基因組
• 插入突變的風險低
• 采用VSV-G包膜，宿主范圍廣泛
• 分裂細胞中的瞬時表達，非分裂細胞中的穩定表達
• 與任何慢病毒載體配套使用，產生非整合型的慢病毒
• 產生高滴度慢病毒

簡而言之，非整合型慢病毒高表達目的基因，又不會引起突變，是一種非常有效的基因研究工具。

作為病毒包裝領域的佼佼者，百恩維生物還有逆轉錄病毒，是基因研究技術服務的理想選擇。