該技術克服了實時定量PCR檢測基因表達工作量大、耗時久的缺點,將基因芯片的檢測精度提高到了與實時定量PCR相當?shù)乃健?
qPCR Array技術服務主要實驗步驟如下:
1 客戶樣品RNA抽提
a) 若實驗對象為組織樣品,取適量(50-100mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,加1ml的RNA抽提試劑Trizol,勻漿后抽提RNA。
b) 若實驗對象為細胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細胞,完全吸去培養(yǎng)液后加1ml的RNA抽提試劑Trizol,裂解后抽提RNA。
2 RNA質量檢測
a) 紫外吸收測定法測定RNA在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,以計算其濃度并評估RNA純度。
b) 使用甲醛電泳試劑進行變性瓊脂糖凝膠電泳,檢測RNA純度及完整性。
3 cDNA模板制備
按照逆轉錄酶使用說明將樣品RNA逆轉錄為cDNA。
4 實時定量PCR
根據(jù)說明將cDNA模板適當稀釋后加入到實時定量PCR反應混合液中,然后在含有基因特異性引物的96孔板各孔中加入等量反應液,進行實時定量PCR反應。
5 數(shù)據(jù)處理:利用儀器配套軟件計算各張PCR芯片中的每個基因的Ct值。最后,采用△△Ct方法比較相應基因的表達量變化。
提供實驗報告 :包括詳細的實驗方法及實時熒光定量PCR芯片實驗結果及相關圖表。
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廣州諾特生物科技有限公司,是一家專注于生命科學及化學領域的集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售于一體的高科技企業(yè),是中國領先的生命科學領域科研消耗品及配套服務的專業(yè)供應商。我們提供涉及化學、分子生物學、生物化學、細胞生物學、免疫學、生態(tài)學等諸多領域的儀器、試劑、耗材及相關實驗技術服務。 主營Fermentas、Amresco、oxoid、Abcam、Gibco、Hyclone、Corning、Axygen、Cytoskeleton、wako等品牌。 經(jīng)營產(chǎn)品包括:realtimePCR、生化試劑、細胞培養(yǎng)、抗體和因子、核酸抽提、檢測試劑盒、細胞培養(yǎng)皿(瓶)、PCR管、凍存管、移液管、槍頭等試劑耗材。