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BioNano單分子光學(xué)圖譜
Bionano公司利用其專利的芯片技術(shù)開發(fā)的Irys系統(tǒng)可以對(duì)長(zhǎng)鏈DNA單分子成像,在更短時(shí)間提供更完整的基因圖譜。
服務(wù)類別:測(cè)序/合成總訪問(wèn):3825
最后更新:2015-8-19半年訪問(wèn):48
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NGS可以獲得大量的測(cè)序數(shù)據(jù)但是由于讀長(zhǎng)較短,無(wú)法直觀的看到整個(gè)基因組范圍的結(jié)構(gòu)變化,而且由于基因組的復(fù)雜性(重復(fù)序列和結(jié)構(gòu)變異)限制了基因組的重構(gòu)和對(duì)功能原件的理解。因此迫切需要針對(duì)更長(zhǎng)片段的分析方法。BioNano公司利用其專利的芯片技術(shù)開發(fā)的Irys系統(tǒng)可以對(duì)長(zhǎng)鏈DNA單分子成像,在更短時(shí)間提供更完整的基因組光學(xué)圖譜。
 
Irys系統(tǒng)特點(diǎn)
1. 長(zhǎng)鏈DNA分子 ---可檢測(cè)長(zhǎng)達(dá)幾百kb的單鏈DNA分子,很好解決重復(fù)序列和可變區(qū)對(duì)研究帶來(lái)的影響。
2. 高質(zhì)量的數(shù)據(jù) ---單分子DNA通過(guò)納米通道被拉直平行排列,利用高質(zhì)量圖像使基因組結(jié)構(gòu)展現(xiàn)無(wú)遺。
3. 應(yīng)用靈活 ---開放性的平臺(tái)適合研究人員進(jìn)行多個(gè)領(lǐng)域的研究,尤其在de novo和染色體結(jié)構(gòu)變異方面提供了全新的研究方法。
 
技術(shù)路線
 
生物信息學(xué)分析
 
部分結(jié)果展示
單分子長(zhǎng)度分布統(tǒng)計(jì)
 
結(jié)構(gòu)變異結(jié)果
 
De novo拼接統(tǒng)計(jì)
 
樣品要求
1) 樣品濃度:最低濃度40ng/µl~200ng/µl。
2) 樣品總量:每個(gè)樣品總量不少于10µg。
3) 樣品溶劑:基因組完整(大于等于150kb)、無(wú)污染。
4) 樣品運(yùn)輸:DNA低溫運(yùn)輸(4℃);且在運(yùn)輸過(guò)程中請(qǐng)用parafilm將管口密封以防出現(xiàn)污染。 
 
應(yīng)用案例
PLOS ONE.2013;8(2):e55864. doi: 10.1371.
Rapid Genome Mapping in Nanochannel Arrays for Highly Complete and Accurate De Novo Sequence Assembly of the Complex Aegilopstauschii Genome. Hastie AR, Dong L, Smith A, Finklestein J, Lam ET, Huo N, Cao H, Kwok PY, Deal KR, Dvorak J, Luo MC, Gu Y, Xiao M.
 
背景:
1. 植物擁有巨大的基因組,大量的重復(fù)序列。這對(duì)于目前的測(cè)序技術(shù)依然是個(gè)嚴(yán)峻的挑戰(zhàn),利用 NGS技術(shù)依然無(wú)法產(chǎn)生足夠大的contig來(lái)克服重復(fù)序列帶來(lái)的困擾。
2. BioNano技術(shù)平臺(tái)產(chǎn)生的熒光標(biāo)記大片段DNA分子可以很好的改善這一問(wèn)題。本文利用該技術(shù)可以快速將節(jié)節(jié)麥(Aegilopstauschii)的2.1M高重復(fù)區(qū)域的組裝完整性由75%提升到95%。
 
研究方法:
1. 從27個(gè)BAC克隆分別抽取DNA混合。
2. BioNano建庫(kù)測(cè)序。
3. 454建庫(kù)測(cè)序。
4. 數(shù)據(jù)拼接,基因組組裝優(yōu)化。
5. 利用SNapshot方法進(jìn)行驗(yàn)證。
 
結(jié)果分析:
1. 得到2.1M區(qū)域的完整基因組圖譜,并用snapshot驗(yàn)證得到一致結(jié)果。
2. 將BioNano得到的基因組圖譜與NGS拼接得到的contig序列比較,發(fā)現(xiàn)contig序列存在各種類型的錯(cuò)誤,這些錯(cuò)誤被證實(shí)是由于NGS數(shù)據(jù)覆蓋度不夠,重復(fù)序列對(duì)NGS數(shù)據(jù)拼接干擾等因素造成的。
3. 利用BioNano數(shù)據(jù)修正后得到更加可靠的拼接結(jié)果。
 
參考文獻(xiàn)
[1]  Lam ET, Hastie A, Lin C, Ehrlich D, Das SK, Austin MD, Deshpande P, Cao H, Nagarajan N, Xiao M, Kwok PY. Genome mapping on nanochannel arrays for structural variation analysis and sequence assembly.NatBiotechnol. 2012 Aug;30(8):771-6.
[2]  Das SK, Austin MD, Akana MC, Deshpande P, Cao H, Xiao M. Single molecule linear analysis of DNA in nano-channel labeled with sequence specific fluorescent probes. Nucleic Acids Res. 2010 Oct;38(18):e177. doi: 10.1093/nar/gkq673. Epub 2010 Aug 10.
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