現(xiàn)在一般都采用亞磷酰胺化學合成Oligo DNA片段，具有高效、快速偶聯(lián)以及起始反應物比較穩(wěn)定的特點。該方法是在固相載體上完成DNA鏈的合成的，合成時從3'→5'方向進行，通常3'端的第一個堿基結合在Glass擔體（Controlled Pore Glass，CPG）上。Oligo DNA合成的原理基本相同，主要差別在于合成產(chǎn)率的高低、試劑消耗量和單個循環(huán)用時的不同。我公司采用的合成儀主要機型為ABI3900高通量合成儀。

合成的詳細過程見圖1，現(xiàn)簡要說明如下：

圖1 Oligo DNA合成原理圖。N1代表第一個堿基，N2代表第二個堿基，依次類推。

第一步，三氯乙酸和預先連接在固相載體（CPG）上的第一個核苷酸反應（其活性基團處于被保護狀態(tài)），脫去核苷酸5‘-羥基的保護基團DMT，獲得游離的5‘-羥基；

第二步，活化新的堿基單體（Phosphoramidite)，準備與第一個堿基進行反應；

第三步，合成DNA的原料（亞磷酰胺保護的核苷酸單體）與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，它的3‘端被活化，5‘-羥基仍然被DMT保護，與溶液中游離的5‘-羥基發(fā)生縮合反應；

第四步，帶帽(capping)反應，縮合反應中可能有極少數(shù)5‘-羥基沒有參加反應(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑終止其后繼續(xù)發(fā)生反應，這種短片段可以在純化時分離掉；

第五步，在氧化劑碘的作用下，亞磷酰形式轉變?yōu)楦�穩(wěn)定的磷酸三酯。（即將三價磷氧化成五價磷) （重復進行Step1～Step5的循環(huán)，直至合成完所需的Oligo DNA序列）        

第六步，合成結束后，將Oligo DNA分子從CPG上切下，再進行進一步的純化。

        合成過程中可以觀察TCA處理階段的顏色判定合成效率。連接在CPG上的引物被切下來，通過, PAGE等手段純化引物，成品引物用C18濃縮、脫鹽，測定OD260定量，根據(jù)定單要求分裝。

我公司合成Oligo DNA制品有如下特點：

1  高質量合成。使用進口試劑，合成高質量的DNA制品。

2  高純度純化。推出脫鹽純化、PAGE純化、HPLC純化三種級別制品，客戶可根據(jù)實驗需要進行選擇。我們保證對每個制品都進行嚴格的質量管理。

3  完善的數(shù)據(jù)。制品包裝中附有制品相關的多種數(shù)據(jù)，包括：合成的原始數(shù)據(jù)，A、G、C、T各堿基的分布情況，分子量，OD數(shù)，nmol數(shù)等，使用方便。

上海桑尼生物科技有限公司成立于2003年2月，是一家以提供各類技術服務和生命科學研究所需的實驗室試劑、儀器耗材的專業(yè)化公司。公司產(chǎn)品覆蓋了DNA合成、DNA測序、DNA克隆、全基因合成、SNP基因分型、熒光定量PCR、各種酶類、分子生物學試劑等。上海桑尼是美國ExtraGene實驗室耗材國內華東地區(qū)獨家代理商。此外，公司還代理銷售Amresco、MBI(Fermentas)、Promega、等國外知名公司的產(chǎn)品。