方案摘要：依據(jù) GB 5749《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》檢測(cè)水樣中大腸菌群（標(biāo)準(zhǔn)為不得檢出）。本方案利用濾膜法過濾法，將濾膜放置在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基培養(yǎng)后計(jì)數(shù)，達(dá)到檢測(cè)出生活飲用水中的總大腸菌群數(shù)量。培養(yǎng)基自動(dòng)制備分裝儀通過選擇性培養(yǎng)基精準(zhǔn)配制、無菌流體控制、自動(dòng)化流程管理等技術(shù)原理，解決了生活飲用水大腸菌群檢測(cè)中手工操作的效率低、誤差大、安全性不足等問題，為水質(zhì)微生物檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化和智能化提供了關(guān)鍵技術(shù)支撐，尤其適用于大規(guī)模水樣的快速篩查與質(zhì)量監(jiān)控。
 
方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
       通過自動(dòng)培養(yǎng)皿分裝儀完成選擇性培養(yǎng)基的分裝，使用孔徑為 0.45μm 的微孔濾膜對(duì)水樣進(jìn)行過濾，過濾后將濾膜貼附于選擇性培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，待形成典型菌落后，使用自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀對(duì)總大腸菌群數(shù)量進(jìn)行快速計(jì)數(shù)。
 
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、培養(yǎng)基和試劑
① 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基
② 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液
 
2、儀器與設(shè)備
① 過濾設(shè)備：配備濾器和抽濾裝置。
② 濾膜：孔徑0.45um。
③ 無齒鑷子。
④ 恒溫培養(yǎng)箱。
⑤ 自動(dòng)培養(yǎng)皿分裝儀  fluidot FDT-MF80。
⑥ 自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀SHASHIN KAGAKU，PSF-1100。
⑦ RAYPA培養(yǎng)基自動(dòng)制備分裝儀。
 
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、濾膜滅菌:將濾膜放大燒杯中，加入純水，置于沸水浴中煮滅菌3次，每次15min。前兩次煮沸后需更換純水洗滌2-3次，以除去殘留溶劑，或使用符合要求的一次性無菌濾膜。
2、濾器滅菌。用點(diǎn)燃的酒精棉球火焰滅菌。也可用高壓蒸收滅菌器121℃高壓蒸汽滅菌20 min。
3、用鑷子夾濾膜邊緣部分、將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上，固定好濾器，將100 mL水樣(如水樣含菌數(shù)較多，，可減少過濾水樣量，或?qū)⑺畼酉♂專┳⑷霝V器中，打開濾器閥門，-5.07 x10'Pa（-0.5大氣壓）下抽濾。
4、過濾完水樣后，再抽氣約5S，關(guān)上濾器閥門，取下濾器，用鑷子夾取濾膜邊緣部分，移放在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，濾膜截留細(xì)菌面向上，濾膜應(yīng)與培養(yǎng)基完全貼緊，兩者間不應(yīng)留有氣泡，然后將平皿倒置，放入36℃±1℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h±2h。
 
 
四、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
 1、挑取紫紅色且具有金屬光澤的菌落、深紅色不帶或略帶金屬光澤的菌落和淡紅中心色較深的菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。
2、凡革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，再接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，于31℃±1℃培養(yǎng)24h±2h，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，則判定為總大腸菌群陽性。 

按公式(1)計(jì)算濾膜上生長的總大腸菌群數(shù)，以每100 mL水樣中的總大腸菌群菌落數(shù)(CFU/100ml)報(bào)告結(jié)果。