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HEK293培養(yǎng)基適合于不同亞型HEK293細(xì)胞的高密度懸浮培養(yǎng)

瀏覽次數(shù):578 發(fā)布日期:2025-2-7  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

上海惠誠(chéng)生物提供的HEK293 瞬轉(zhuǎn)表達(dá)基礎(chǔ)培養(yǎng)基(Basal Medium)與補(bǔ)料培養(yǎng)基(Feed Medium)是完全化學(xué)成分限定(Chemically Defined),均不含血清、水解物及任何動(dòng)物來(lái)源的成分,適合于不同亞型 HEK293 細(xì)胞的高密度懸浮培養(yǎng),可實(shí)現(xiàn)重組蛋白和抗體的高水平表達(dá):培養(yǎng) 5 天表達(dá)量在200mg/L 左右,7 天表達(dá)量 500mg/L 左右,部分可達(dá) 1g/L 以上。

上海惠誠(chéng)生物提供的HEK293 瞬轉(zhuǎn)表達(dá)培養(yǎng)基已完成美國(guó) DMF 登記(DMF039790),更有力的支持客戶需求。


HEK293 細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品描述

名稱  備注 谷氨酰胺 葡萄糖 生長(zhǎng)因子  適用細(xì)胞
HEK293 CD05 初始培養(yǎng)基  6 g/L  不含 Expi293F 等
HEK293 FM01AB 補(bǔ)料培養(yǎng)基 不含  60g/L  不含
HEK293 enhancer 分泌性蛋白表達(dá)增強(qiáng)劑 不含
PEI 轉(zhuǎn)染試劑  0.5mg/mL

推薦使用說(shuō)明

步驟 使用方法
關(guān)鍵參數(shù)匯總 轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度:3~5e6 cells/mL, DNA: 1.3mg/L, PEI:4mg/L
細(xì)胞傳代

0.3 e6 cells/mL 接種,3 天傳代一次,當(dāng)細(xì)胞倍增時(shí)間不低于對(duì)照培養(yǎng)基時(shí)認(rèn)為細(xì)胞完全適應(yīng)新培養(yǎng)基,進(jìn)入下一步驟

轉(zhuǎn)染前一天 細(xì)胞密度調(diào)整到~2 e6 cells/mL 左右
質(zhì)粒與 PEI 預(yù)處理

以 20mL 培養(yǎng)體積為例(其他培養(yǎng)體積,相關(guān)試劑需要按體積折算)

1: 取 160uL Trans PEI (母液是 0.5mg/mL),加入 1mL HEK293 CD05 培養(yǎng)基混合均勻;

2:像 1)中混合液體中加入 26ug 的質(zhì)粒(即質(zhì)粒用量 1.3mg/L),混合均勻;

3: 靜止 15~20min

轉(zhuǎn)染

1:用新鮮培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度至 3~5 e6cells/mL (很重要);

2:緩慢滴加上述 PEI 與 DNA 的混合物,并搖動(dòng)搖瓶使混合物均勻分散;

3:轉(zhuǎn)染當(dāng)日記為 Day0,放入 37℃搖床中,完成轉(zhuǎn)染;

補(bǔ)料培養(yǎng)

1:轉(zhuǎn)染后~24h 內(nèi)補(bǔ)加 0.5%的 HEK293 enhancer ( 僅此一次,且只分泌性蛋白或抗體需要添加 ,膜蛋白無(wú)需加 HEK293 enhancer)和 7%的 HEK293 FM01AB;

2:Day4 再補(bǔ)加一次 7%的 HEK293 FM01AB 和 3g/L 的葡萄糖 (如培養(yǎng)時(shí)間≤5 天,此步忽略);

3:活力≤70%即可培養(yǎng)結(jié)束或其他指定培養(yǎng)基時(shí)間

溫度及其他參數(shù)

1:溫度 37℃,不降溫

2:搖床轉(zhuǎn)速 120rpm, 50mm 振幅,5-8% CO2;

產(chǎn)品運(yùn)輸及存儲(chǔ)

運(yùn)輸:常溫或冷鏈運(yùn)輸;

存儲(chǔ):2~8℃,干燥、避光保存;

有效期:基礎(chǔ)培養(yǎng)基干粉:2 年;

基礎(chǔ)培養(yǎng)基液體:1 年;

補(bǔ)料培養(yǎng)基干粉:2 年;

補(bǔ)料培養(yǎng)基液體:1 年(開(kāi)封后建議在 3 個(gè)月內(nèi)使用完)。

應(yīng)用范圍

上海惠誠(chéng)生物生物提供的培養(yǎng)基可用于 HEK293 細(xì)胞凍存、復(fù)蘇、傳代、高密度強(qiáng)化工藝培養(yǎng)及灌流培養(yǎng),可

實(shí)現(xiàn)細(xì)胞快速生長(zhǎng),維持細(xì)胞高活率及蛋白該表達(dá)。

使用指南

細(xì)胞凍存

1.準(zhǔn)備處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)較好的細(xì)胞,且細(xì)胞活率在 90%以上;

2.檢測(cè)活細(xì)胞密度,計(jì)算所需的凍存培養(yǎng)基體積,計(jì)算最終細(xì)胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL;

3.準(zhǔn)備好所需的凍存培養(yǎng)基:90%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10% DMSO,2~8℃冷藏保存;

4.設(shè)置離心力 200×g,離心 5 min,用凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞至凍存體積;

5.將懸浮細(xì)胞等分保存至適宜規(guī)格的細(xì)胞凍存管中;

6.將細(xì)胞凍存管置于程序降溫盒中,按照降溫標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行降溫;

7.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中保存。

細(xì)胞復(fù)蘇

1.提前打開(kāi)水浴鍋,并設(shè)置溫度至 36.5℃~37.0℃;

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上海惠誠(chéng)生物科技有限公司自2010年成立以來(lái),一直致力于為客戶提供試劑,儀器設(shè)備和耗材一站式服務(wù)。目前在蘇州和南通的研發(fā)生產(chǎn)基地,專注于體外診斷蛋白,靶標(biāo)蛋白,工業(yè)用酶和細(xì)胞因子的生產(chǎn)和定制,按照GMP標(biāo)準(zhǔn),為工業(yè)客戶提供大包裝蛋白原料。

發(fā)布者:上海惠誠(chéng)生物科技
聯(lián)系電話:18018625233
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標(biāo)簽: HEK293培養(yǎng)基
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