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OPM-293 CD05完全化學成分確定培養(yǎng)基應用及培養(yǎng)流程

瀏覽次數:1335 發(fā)布日期:2024-8-27  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
OPM-293 CD05 是完全化學成分確定(Chemically-defined)的培養(yǎng)基,不含水解物、蛋白、生長因子及任 何動物來源的成分,適合于各種亞型 HEK293 細胞的高密度培養(yǎng)及高效率瞬時轉染

應用范圍 

OPM-293 CD05 即適用于科研應用,也適用于基于細胞培養(yǎng)的大規(guī)模生物藥生產,但不可直接用于人體或作為藥 物使用。

儲存運輸方法 

儲存:2~8℃冷藏,干燥避光保存 

運輸:常溫(液體)、冷藏(干粉) 

液體培養(yǎng)基配制方法 

1. 取潔凈的配制容器,建議一次性配制體積不低于 1L;

2. 加入最終配制體積 90%的超純水或注射用水,水溫控制在 25~35°C; 

3. 稱量 19.86g/L 干粉培養(yǎng)基,緩慢加入水中攪拌 10 分鐘; 

4. 稱量 2.22g/L 碳酸氫鈉,加入水中攪拌; 

5. 緩慢加入 5N NaOH 調節(jié) pH 到 8.3~8.5,攪拌 30 分鐘,此時應完全溶解; 

6. 緩慢加入 5N HCl 將 pH 調回至 7.0; 

7. 定容到最終配液體積,繼續(xù)攪拌 5 分鐘,測 pH,用 5N NaOH 或 5N HCl 將 pH 調回至 7.0; 

8. 取樣測滲透壓,加入 NaCl 調節(jié)滲透壓至 275±10mOsm/kg(滲透壓計算公式:NaCl 添加量(g)=配液體積 (L)*(275-檢測值)/31.5); 

9. 繼續(xù)攪拌 10 分鐘,無菌過濾到合適容器,2~8℃避光保存。

干粉及液體培養(yǎng)基質量指標

培養(yǎng)條件 

溫度 37℃,濕度 80%,5~8%CO2 

搖床設置:轉速 115~125rpm(振幅 50mm) 

細胞復蘇 

1. 在 37℃水浴中快速(<2min)融化冷凍的細胞;

2. 將冷凍管中的細胞液全部轉移到含有 30mL 預溫過的 OPM-293 CD05 培養(yǎng)基的 125mL 搖瓶中; 

3. 放入 37℃,5~8% CO2,轉速 115~135rpm(振幅 50mm),濕度 80%的搖床中培養(yǎng)

細胞傳代 

1. 將 OPM-293 CD05 培養(yǎng)基放入 37℃條件下預熱 20-30min。

2. 取細胞密度≥3×10 6 ~ 4×10 6cells/mL、活率≥95%、處于對數生長期中期的細胞進行傳代;注意:不同類 型的 HEK293 細胞可能具有不同的對數生長期范圍。 

3. 按接種密度為 0.3×10 6 ~ 0.6×10 6cells/mL。 

4. 無菌轉移所需量的種子液至合適體積的搖瓶中,并添加所需體積的已預熱的 OPM-293 CD05 培養(yǎng)基。 

5. 將搖瓶放入溫度 37℃,濕度 80%,轉速 110-150rpm(振幅 50mm),5%~8%CO2的細胞培養(yǎng)搖床中進行培養(yǎng)。 *每 2~3 天用新鮮的培養(yǎng)基按上述步驟進行傳代培養(yǎng)。

細胞馴化 

直接接種法 

1. 對于可以直接馴化的細胞,可以從無血清培養(yǎng)基中直接接種到 OPM-293 CD05 培養(yǎng)基中,接種密度參考傳 代步驟。

2. 繼續(xù)傳代細胞,直到細胞穩(wěn)定生長。 

3. 傳代幾代之后,細胞密度在接種的 3~4 天內達到 3×10 6cells/mL、細胞活性≥95%。此時,可以認為細胞 已被馴化成功。

梯度馴化法 

1. 如果直接馴化效果不佳,請嘗試按照以下梯度馴化表格進行操作。

2. 選擇低代次的細胞,并確保細胞處于對數期。 

3. 使用原始培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞,并繼續(xù)使用原始培養(yǎng)基傳代 2~3 代,以實現穩(wěn)定的細胞生長。 

4. 在完全使用 OPM-293 CD05 培養(yǎng)基接種 3~4 天之后,VCD 應該穩(wěn)定達到 3×10 6cells/mL,細胞活性≥95%。 此時,細胞已經馴化到 OPM-293 CD05 培養(yǎng)基中。

轉染和瞬時表達 

轉染條件應根據具體情況進行優(yōu)化,可能需要通過 DOE 方法確定。以下轉染條件僅供參考

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發(fā)布者:上海惠誠生物科技
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