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PIPETTY電動移液器在酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實驗中的應(yīng)用

瀏覽次數(shù):1221 發(fā)布日期:2024-8-27  來源:程淇生物

一、實驗準備:
1、pipetty電動移液器MSIC01-02-1000
2、待檢測的細胞培養(yǎng)上清液或細胞沉淀,
3、Elisa試劑盒
4、酶標儀
5、37攝氏度烘箱
6、離心管、96孔板等

二、實驗步驟:
1、試劑準備
①細胞培養(yǎng)上清液配制:用無菌管收集細胞培養(yǎng)上清液,2000-3000rpm離心20分鐘,仔細收集上清液
②洗滌液配制:蒸餾水1:20稀釋。
③標準品配制:取7個1.5ml離心管,分別標注S2,S3,S5,S6,S7,blank,分別加入樣品稀釋液/標準品對沖,標準曲線濃度分別為4000,2000,1000,500,250,125,6.25,0。
④生化素抗體工作液配制:使用前20分鐘稀釋100倍
⑤SABC復(fù)合物工作液配制:使用前20分鐘稀釋100倍
⑥TMB顯色液配制:使用前10分鐘,A:B 1:1混合,避光保存。

2、檢測程序

①加樣:空白孔用pipetty移液器加入50ul標準品/樣品稀釋液,其余孔加入標準品/待測樣品50ul,貼上封板膠,37攝氏度,40分鐘放置。
②洗板:每一個孔加入300ul洗滌液震蕩浸泡2分鐘,濾紙印干。
③加抗體:空白孔加入100ul生物素化抗體稀釋液,其余孔各加入 1x的生物素化抗體工作液100ul,貼上封板膠。
④洗板:同上。
⑤加SABC:空白孔加入 100ul SABC 稀釋液,其余孔各加SABC 復(fù)合物工作液 100ul,貼上封板膠紙,混勻后置37攝氏度,30分鐘。
⑥洗板:同上。
⑦顯色:每孔加入提前配置好的TMB 混合液 100ul,貼上封板膠紙,混勻后置37°C暗處反應(yīng) 10-20分鐘 (具體顯色時間根據(jù)顯色結(jié)果而定)。
⑧將pipetty移液器調(diào)到混勻模式,混勻,然后每孔加入 100ul 終止液,30 分鐘內(nèi)用酶標儀 在450nm 處測吸光值。

3、結(jié)果判斷與計算
以標準品濃度作橫坐標,OD 值作縱坐標,手工繪制或用軟件繪制標準曲線,根據(jù)樣品 OD值計算出相應(yīng)含量,再乘以稀釋倍數(shù)即可。
 
小tips在這
1.顯色底物現(xiàn)配現(xiàn)用,避免污染,還有前面需要配制的試劑也是如此.
2.使用前檢查底物在加入96孔板之前應(yīng)為無色透明,這個非常重要.
3.孵育時間,按說明書條件來,顯色需要根據(jù)顏色變化來判斷是否可以終止反應(yīng).

 
發(fā)布者:廣州市程淇生物技術(shù)有限公司
聯(lián)系電話:020-87228031 020-87228316
E-mail:info@icfbio.com

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