Comparison and optimization of SAR‐PAGE tests for erythropoietins in doping analysis【W(wǎng)ILEY】
興奮劑檢測（SAR-PAGE法測定紅細(xì)胞生成素）的條件比較與優(yōu)化

 

 

促紅細(xì)胞生成素(EPOs)刺激紅細(xì)胞的生成，增強(qiáng)運(yùn)動員體能及耐力，屬于世界反興奮劑機(jī)構(gòu)(WADA)清單S2中列出的違禁品。根據(jù)目前的WADA技術(shù)文件，篩查和確認(rèn)所有EPOs類型的唯一方法--基于分子量分離的肌氨酰聚丙烯酰胺凝膠電泳(SAR-PAGE)后進(jìn)行蛋白印跡雜交（Western Blotting）。免疫純化和蛋白轉(zhuǎn)移的效率對于確保EPOs篩查的選擇性和靈敏度至關(guān)重要。本研究對SAR-PAGE步驟進(jìn)行了一些比較和優(yōu)化，即根據(jù)不同的免疫純化方法，優(yōu)化第一次印跡實(shí)驗(yàn)的轉(zhuǎn)膜條件，對尿液和血液樣本的選擇性、重復(fù)性和靈敏度進(jìn)行了比較，同時(shí)建立并比較了尿液和血液分析的快速流程。與常用的恒流方法相比，1.0 mA/cm²  進(jìn)行60 min然后1.56 mA/cm² 進(jìn)行20 min的兩步轉(zhuǎn)膜流程可有效提高印跡效率。不同的免疫純化方法在選擇性和敏感性方面無顯著差異。考慮到操作復(fù)雜性、時(shí)間和成本等因素，對尿液的篩查和確認(rèn)分別使用StemCell^®純化試劑盒純化后進(jìn)行單次印跡和磁珠純化后進(jìn)行雙次印跡。血液樣本的篩查和確認(rèn)分別使用磁珠和MAIIA^®試劑盒純化后進(jìn)行雙次印跡。對尿液和血液分析進(jìn)行雙次印跡的快速流程可確保高靈敏度和高選擇性。

 

研究中使用Blotcycler進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)印跡雜交替代人工操作，保證嚴(yán)格統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)程序，有效提高單印跡雜交的穩(wěn)定性和重復(fù)性。

Comparison and optimization of SAR-PAGE tests for erythropoietins in doping analysis
Xinmiao Zhou, Lisi Zhang, Sen He, Li Shen, Chunji He
First published: 30 October 2019
https://doi.org/10.1002/dta.2703

來自美國Precision Biosystems公司的Blotcycler，是一款全自動的蛋白質(zhì)印跡雜交系統(tǒng)，可自動化完成封閉、孵育、清洗和一抗回收的一系列工作，徹底解放您的雙手。專利的流體清洗減少二抗在膜上的附著，降低背景，提高信噪比和靈敏度；自動化的操作流程避免了手工操作帶來的誤差，保證了批次內(nèi)和批次間實(shí)驗(yàn)的高度重復(fù)性；高通量操作和多條件的設(shè)定可以輔助您優(yōu)化Western Blot 實(shí)驗(yàn)的條件；開放的實(shí)驗(yàn)平臺，無需其他額外投入。Blotcycler是從事Western Blot實(shí)驗(yàn)的科研工作者最佳選擇。

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