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肺癌PD-1免疫檢查實驗方法與結果分析

瀏覽次數:2666 發布日期:2023-8-17  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

實驗簡介

PD-1,全稱為“程序性死亡受體1”,又稱為CD279,是一種重要的免疫抑制分子。PD-1主要功能是下調免疫系統對人體細胞的反應、抑制T細胞炎癥活動,調節免疫系統并促進自身耐受。PD-1發揮功能可以預防自身免疫性疾病,但也會阻止免疫系統攻擊癌細胞,造成腫瘤進展。通過流式細胞技術檢測PD-1表達,可以反映腫瘤進展情況。多項研究顯示,PD-1在腫瘤患者的外周血CD8+T細胞表面過表達,并與患者的病理變化及臨床療效密切相關。CD8+PD-1+T 細胞在癌患者外周中的比例明顯增加,且晚期患者的CD8+PD-1+ T細胞水平高于早期癌患者,由此提示PD-1分子在癌患者外周血CD8+ T 細胞中的應答水平發生改變,并與患者疾病的進展密切相關。

 

實驗材料與方法

檢測方法:

微信截圖_20230817102707.png

樣本制備:

1. 消化酶制備單細胞懸液,并過濾;

2. 裂解紅細胞,1 mL 1X RBC裂解紅細胞,室溫10 min(根據廠家推薦);

3. 清洗:加入1 ml染色緩沖液,350g,離心5 min,棄上清;

4.可重復步驟4;

5. 染色:根據廠家推薦用量進行染色,室溫避光孵育20 min;

6. 清洗:加入1 ml染色緩沖液,350g,離心5 min,棄上清;

7.加入200-300 ul染色緩沖液,重懸后上機檢測。

 

實驗結果:

微信截圖_20230817103832.png

 

 數據結果

圈門邏輯:

腫瘤組織中先圈出白細胞的信號CD45+(圖A),再圈總的CD3+T細胞(圖B),再分別看CD4(圖C)、CD8(圖D)、NK和NKT(圖E)在淋巴細胞中的占比,最重要的是看PD-1在淋巴的CD3+T細胞的雙陽信號(圖F)。腫瘤組織中淋巴細胞的占比會下降,特別是發展到后期,白細胞整體降低,PD-1在CD3+T中信號明顯。PD-1在CD8+T細胞中表達水平較低。

結果分析總結:

腫瘤組織中,淋巴細胞亞群傾向百分比降低、分群不明顯,但是此次檢測T細胞分群基本明顯。
 

關于層浪生物
       層浪聚焦流式細胞領域,致力于實現流式技術系統化、自動化、智能化,在臨床領域推動流式技術的常規化,在科研領域推進國產流式高端化。目前已推出多款流式產品:2激光8色流式細胞儀于2021年初成功獲得NMPA注冊證;科研型產品3激光14色流式細胞儀FongCyte™上市一年,儀器性能獲得客戶的高度認可;臨床型產品3激光14色流式細胞儀LongCyte™26種型號均獲CE認證。公司核心團隊均在流式技術領域有10余年經驗,十年如一日專注流式技術研究,致力于研發生產穩定、可靠、性能優異的產品。層浪未來將陸續推出更多流式產品,為中國的流式技術發展盡綿薄之力,做行業中流式技術普及者,做客戶信賴的流式伙伴,為中國的臨床和科研事業助飛。

 

圖片
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