植物微粒體分離試劑盒使用說明
描述：
從植物中分離微粒體膜是實驗室中常見實驗，植物細(xì)胞中微粒體部分是植物研究項目的重點。微粒體中富含細(xì)胞膜，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基體，液泡膜和其他膜結(jié)構(gòu)。傳統(tǒng)的分離方法需要大量的樣品量，通過超速離心來分離不同的膜結(jié)構(gòu)，步驟復(fù)雜。MM-018 試劑盒提供了一種快速，簡單無需特殊儀器的微粒體膜分離方法，很小的樣品量（200mg）即可提取。配合優(yōu)化的緩沖液系統(tǒng)和通過簡單的離心即可分離水溶性胞漿蛋白和非水溶性微粒體，特別是細(xì)胞膜部分。無需超高速離心，操作時間小于 1 小時即可從植物中提取天然的微粒體蛋白，蛋白質(zhì)得率可達(dá) 100-200ug/樣品。
應(yīng)用：
可應(yīng)用于 SDS-PAGE，WB，ELISA，IP，酶活性測定，蛋白質(zhì)組學(xué)與膜轉(zhuǎn)運分析。
試劑盒組份(50T)：
1. 25 ml 緩沖液 A
2. 15 ml 緩沖液 B
3. 50 個離心管柱及 2.0ml 接收管
4．2 根塑料研磨棒
儲存：
-20℃儲存。
所需附加材料
1XPBS(pH7.2-7.4)
臺式離心機(jī)（最高離心力 14,000-16,000Xg）
重要產(chǎn)品信息
提取分離前，建議添加蛋白酶抑制劑到 buffer A 中。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑應(yīng)在使用前加入緩沖液 A中。（添加請按照蛋白酶或磷酸酶抑制劑母液比例，例如母液是 100x，添加時按照 1：100 添加，1ml 緩沖液 A添加 10ul 抑制劑）推薦使用 BCA 試劑盒用于蛋白濃度測定。
分離步驟：
1. 將緩沖液，離心管柱及接收管套管放置冰上預(yù)冷。
2. 取 200mg 新鮮植物組織放入離心管柱套管中。植物葉片樣品，先剪碎，卷起或者折疊減小體積放入離心管柱套管中。用 200ul 或 1ml 吸頭反復(fù)擠壓葉片 60 次減少體積。種子和軟莖樣品，用鋒利的刀片切割成小片，放置在離心管柱套管中。
3. 加入 300ul 預(yù)冷的 buffer A 到離心管柱中（注意：震蕩搖勻 buffer A 后迅速吸取）。用試劑盒中提供的塑料研磨棒反復(fù)按壓扭轉(zhuǎn)研磨植物組織 2-3 分鐘（大概 100 次）。（注意：塑料研磨棒可以重復(fù)使用，用蒸餾水徹底沖洗干凈，用紙巾擦干即可）。
4. 蓋上蓋子，4℃，14,000Xg，離心 20 分鐘。棄去離心管柱，將接收管中上清完全棄去。
5. 在接收管中加入 300ul 預(yù)冷的 buffer B，用吸頭上下吹打或渦旋震蕩重懸沉淀。4℃，11,000Xg，離心 10 分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移到新的 2.0ml 預(yù)冷的接收管中。
6. 加入 1ml 預(yù)冷的 1 X PBS（pH7.2-7.4）到管子中，翻轉(zhuǎn)幾次混勻。4℃，14,000Xg，離心 30 分鐘，棄去上清液，沉淀即為微粒體組分。微粒體可根據(jù)下游實驗使用含不同表面活性劑的緩沖液（50-200ul）溶解。推薦使用下表中 MinuteTM 系列溶解液溶解微粒體。做等電聚焦（2D 凝膠第一維）我們建議使用：7M 尿素/2M硫脲/2%Chaps 和 20mM DTT (使用前將 DTT 加入以上混合液中)。
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com