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超微量測定蛋白核酸含量的應用方案

瀏覽次數:680 發布日期:2023-7-27  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
實驗原理
測蛋白質含量的原理
由于蛋白質分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵,因此蛋白質有吸收紫外線的性質,吸收高峰在280nm波長處。在此波長范圍內,蛋白質溶液的光吸收值( A280)與其含量成正比關系,可用作定量測定。

測核酸含量的原理
核酸及其衍生物,核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性質,其吸收高峰在260nm波長處。DNA濃度( ug/ml) =A260/0.024/L*稀釋倍數(L為比色池厚度1cm)

儀器及試劑
UL-1000超微量紫外可見分光光度計
標準蛋白溶液。結晶牛血清蛋白,預先經微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量,根據其純度配制成1mg/ml蛋白溶液。
待測蛋白溶液
核酸溶液

操作步驟
繪制標準曲線
按下表分別向每支試管加入各種試劑,搖勻。選用光程為1cm的石英比色杯,在280nm波長處分別測定各管溶液的0A280值。以A280值為縱坐標,蛋白質濃度為橫坐標,繪制標準曲線。
 
樣品測定
取待測蛋白質溶液1ml,加入蒸餾水3ml,搖勻,按上述方法在280nm波長處測定光吸收值,并從標準曲線上查出待測蛋白質的濃度。
取待測核酸溶液1ml,加入蒸餾水3ml,測定核酸的濃度。

實驗結果
測得的八個試管中溶液的A值如圖所示
蛋白質樣品的A值為0.063
核酸樣品的A值為0.039

蛋白質含量
根據方程當A=0. 063時,0. 0630=0. 6123c+0. 0070.
C=0.0945mg/ml .
因為溶液稀釋了4倍,所以樣品蛋白的濃度為
0.0945*4=0. 378mg/ml

核酸含量
DNA濃度= A260/0.024/L*稀釋倍數
=0.039/0.024/1*4
=7.8 ug/ml
 
發布者:上海美析儀器有限公司
聯系電話:400-6164686
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