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m6A RNA甲基化研究的前期探索性實驗思路分享

瀏覽次數:673 發布日期:2023-3-30  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
近年來,m6A RNA甲基化作為國家自然科學基金表觀遺傳學研究的熱門領域,相關研究成果層出不窮,高分文章不斷。研究方向包括疾病發生發展、發育和分化、環境暴露與響應等。
 

研究人員為m6A甲基化課題申請作準備以及為降低m6A甲基化實驗風險,通常會進行m6A甲基化研究的前期探索性實驗,主要包括:
· 檢測m6A writers、readers、erasers的表達
· 檢測整體m6A甲基化水平變化
· m6A writers、readers、erasers基因干擾/敲除/過表達
· 其他前期實驗
 
一、檢測m6A writers、readers、erasers的表達
方法包括:
· RT-qPCR檢測其mRNA表達
· Western blot檢測蛋白質翻譯

e.g. 小鼠腦損傷前后觀察到METTL14和FTO的RNA表達顯著變化
 
二、檢測整體m6A甲基化水平變化
方法包括:
²  m6A甲基化免疫熒光染色(定性)
²  m6A斑點雜交(定性)
²  質譜法(定量)
²  比色法(定量)

 

三、m6A writers、readers、erasers基因干擾/敲除/過表達
方法包括:
· 檢測處理后潛在m6A修飾基因的蛋白表達
· 檢測處理后所研究的表型和功能變化
白質翻譯水平下調,METTL3/14過表達又造成相關基因蛋白質水平上調。
 
四、其他前期實驗
在沒有條件開展甲基化相關前期實驗的情況下,也可以開展其他預實驗。如:
· 關鍵表型指標測定
· 轉錄組(成本低廉)—— 基于m6A可調節轉錄本的成熟、降解、穩定性
 
在進行前期探索性預實驗后,m6A RNA甲基化的研究思路與項目設計還包括:技術選擇、數據挖掘、下游驗證。
· 技術選擇:
m6A甲基化檢測技術有哪些?
如何根據現有的實驗條件選擇最合適的技術開始課題研究?
· 數據挖掘:
理解每一步數據分析的目的和依據
如何篩選m6A調控的目標基因
· 下游驗證:
如何開展m6A調控目的基因表達的驗證實驗
高分突破:打通機制研究思路
 
以上就是關于m6A RNA甲基化研究的前期探索性實驗及研究思路分享。
發布者:深圳市易基因科技有限公司
聯系電話:0755-28317900
E-mail:wuhuanhuan@e-gene.cn

標簽: RNA甲基化 m6A mRNA
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