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常用細胞染色的方法、特點及熒光染料選擇指南

瀏覽次數:3706 發布日期:2023-3-9  來源:absin

細胞培養后,需要對其生長情況、形態甚至生物學性狀進行觀察。由于細胞小而復雜,若不借助適當的手段,難以觀察其形態、結構,更難發現細胞內各種組分的分子組成及功能。目前,已有多種研究細胞的技術,從光學顯微鏡到電子顯微鏡,從一般細胞化學法到免疫化學法。細胞染色是研究細胞生物學特征的一種常用手段,然而,對于細胞實驗新手來說,想要獲得一張漂亮的細胞染色圖并不容易。染色試劑不會選、細胞染色不均勻、染色時切片脫落等都是很常見的問題。今天小愛就為大家整理了幾種常用細胞染色方法及染色劑選擇指南,快來學習!
 

表1 幾種常用細胞染色方法及特點

染色方法

染色特點及應用范圍

革蘭氏染色法

一種重要的細菌鑒別染色法,經染色后,陽性菌呈紫色,陰性菌呈紅色,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特征,從而用以分類鑒定。

瑞氏染色法

瑞氏試劑中酸性伊紅和堿性美藍混合經化學作用后,變成中性的伊紅化美藍,久置后,經氧化而含有天青。此三種染料分別和細胞中的NH3+和COO-等結合,使細胞核胞漿著色。由于系中性染料,又有緩沖液調節酸堿度,所以細胞受染后,藍紅等顏色都較適中,核染質、胞漿以及其中顆粒顯色較為清楚。

姬姆薩染色法

病理學以及疾病研究中常用的染色劑。染色原理和結果與瑞氏染色法基本相同。但該法對細胞核寄生蟲著色較好,結構顯示更清晰,而細胞質和中性顆粒則著色較差。為兼顧二者之長,可用復合染色法。

免疫組化染色法

利用抗原抗體之間的特異性結合,用于研究細胞產物如分子、蛋白質或糖蛋白的表達、定位、分布和遷移等。

 

了解細胞染色方法后,下面小愛向大家介紹研究不同細胞結構用到的熒光染料。


一、細胞膜常用染料

DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細胞膜染料(見表2),它們是一族親脂性的熒光染料,用于細胞的形態學和結構研究。該系列染料進入細胞膜后,會在整個細胞膜上側向擴散,在最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高,染色均一,熒光不易猝滅,無明顯細胞毒性,且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應用于多種細胞的體內示蹤研究,如Treg細胞、間充質干細胞、腫瘤細胞、造血干祖細胞等

 

二、其他細胞結構常用染料

生物染料在細胞結構和組分鑒定中有著廣泛的應用,除細胞膜研究外,我們經常也會對一些其它細胞結構及成分進行探索,例如線粒體、溶酶體、蛋白質、細胞核等,而對于不同的細胞結構有不同的染料進行染色。


三、細胞染色神器DAPI + Phalloidin

DAPI染色液(DAPI Staining Solution)常用于細胞核染色,可將細胞核染成藍色。鬼筆環肽(Phalloidin)是細胞骨架的染色神器,羅丹明標記的Phalloidin(TRITC- Phalloidin)可將細胞染成橙紅色,DAPI與Phalloidin染色液是研究細胞形態變化時經常用到的兩種共染的試劑,染色效果可見圖1[1]:A1-E1用TRITC-鬼筆環肽(橙紅)染色的細胞骨架免疫熒光圖;A2-E2用DAPI(藍色)染色的細胞核免疫熒光圖;A3-E3合并的L929細胞免疫熒光染色圖。圖2[2]是S100A16過表達或下調前后PDAC細胞形態的變化。
 


注意事項:
※  熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡快檢測;
※  避免反復凍融,否則容易失效;
※  DAPI對人體有刺激性,注意適當防護;
※  鬼筆環肽具有毒性,需小心操作(對人的半數致死劑量 LD50約 2mg/kg)。

 

參考文獻

[1] Li J, Chen JN, Peng ZX, et al. Multifunctional Electrospinning Polyhydroxyalkanoate Fibrous Scaffolds with Antibacterial and Angiogenesis Effects for Accelerating Wound Healing[J]. Applied Materials & Interfaces. 2022.

[2] Li T, Ren TY, Huang CM, et al. YS100A16 induces epithelial-mesenchymal transition in human PDAC cells and is a new therapeutic target for pancreatic cancer treatment that synergizes with gemcitabine[J]. Biochemical Pharmacology 189 (2021) 114396.

發布者:愛必信(上海)生物科技有限公司
聯系電話:021-38015121
E-mail:info@absin.cn

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