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THz-PCR技術(shù)在法醫(yī)檢測中展現(xiàn)的應用前景

瀏覽次數(shù):1817 發(fā)布日期:2023-2-27  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負

PCR(聚合酶鏈式反應)是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術(shù),應用十分廣泛,而THz(Tera Hertz,太赫茲)是波動頻率單位之一,指頻率在0.1~10 THz(波長為3000~30μm)范圍內(nèi)的電磁波。二者結(jié)合起來的THz-PCR是一種創(chuàng)新型的新技術(shù),近期國科大溫州研究院PI張峰老師課題組在美國工程技術(shù)-材料科學類期刊ACS Applied Materials & Interfaces雜志上發(fā)表了題為“THz-PCR Based on Resonant Coupling between Middle Infrared and DNA Carbonyl Vibrations”的文章,研究探討了基于中紅外線與DNA羰基振動共振耦合的THz-PCR。
 
 
 
背景介紹:
生物大分子的旋轉(zhuǎn)和振動能級落在太赫茲(THz)波的能量范圍內(nèi),而太赫茲波又可以通過共振耦合方式與生物分子相互作用。在過去的幾十年里,THz技術(shù)已經(jīng)發(fā)展起來,通過光譜成像來區(qū)分正常組織和癌癥組織,例如,通過監(jiān)測DNA甲基化的分子共振指紋圖譜來早期診斷癌癥細胞。在過去幾年中,太赫茲(THz)的應用對生物醫(yī)學、人工智能甚至軍事發(fā)展等重要領(lǐng)域都產(chǎn)生了重大影響。由于THz能量遠低于化學鍵活力,功率低于mW/cm2的THz電磁波在數(shù)十分鐘的照射過程中不會對角膜組織、焦點細胞、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞、皮膚成纖維細胞和脫氧核糖核酸(DNA)造成破壞性傷害,這保證了THz照射的安全應用。作者研究團隊的合作者使用53.53THz激光通過與離子通道中羰基的相干共振耦合來操縱鉀通道,實現(xiàn)了神經(jīng)信號的可逆無創(chuàng)調(diào)節(jié)。還有其他論文報道,35.2 THz的輻射可以與DNA堿基的振動共振,并引發(fā)氫鍵斷裂,這反過來糾正了DNA雜交的錯配率,提高了折紙結(jié)構(gòu)的產(chǎn)率。為了了解太赫茲輻射對其他生命活動的量子效應,特別是那些最重要的生化反應,例如DNA復制,作者研究團隊選擇了53THz激光,以實現(xiàn)中紅外線和DNA羰基之間的振動強耦合(VSC),并探究了它對體外DNA復制(如PCR反應)的影響。
 
實驗方法:
準備好實驗用的DNA和其它相關(guān)檢測試劑、試劑盒等,然后進行PCR擴增反應,PCR實驗在柏恒科技PCR儀上進行(Q3200,Bio-Gener)。PCR程序包括以下兩個階段:第一階段之前是95°C下30秒的預變性過程,然后是八個循環(huán),每個循環(huán)包括95°C的變性過程5秒和62°C的退火過程20秒。此外,第二階段為30個循環(huán),每個循環(huán)包括特殊梯度溫度和梯度時間的變性過程以及37°C下的退火和延伸過程20秒。整個階段使用PCR儀(Q3200,Bio-Gener,圖S1)進行THz輻照。
 
圖S1.THz-PCR體系的實際照片。將含有PCR試劑溶液(20μL)的200μL PCR管安裝到PCR儀中,無需關(guān)閉加熱蓋,并用53.53 THz激光照射。
 
法醫(yī)檢測應用:目標蛋白編碼基因為SOX 21,檢測采用THz PCR和常規(guī)PCR。首先將血染紙切成小塊,浸泡處理后將上清液直接用作PCR檢測的模板。整個階段使用PCR儀(Q3200,Bio-Gener,圖S1)進行THz照射,另一個樣品以相同的方案進行,沒有THz照射作為對照。實驗結(jié)束后進行結(jié)果分析。
 
作者研究團隊中用到的PCR儀來自柏恒科技,Q3200熒光定量PCR儀是柏恒科技創(chuàng)新研發(fā)的一款儀器產(chǎn)品,雙槽設(shè)計,一機兩用,產(chǎn)品功能強大。
 
實驗結(jié)果:
使用聚合酶鏈反應(PCR)作為測量手段,研究團隊發(fā)現(xiàn)THz照射可以將DNA雙鏈體的變性溫度降低約3°C,這允許在較低溫度下進行PCR,促進長時間擴增反應而不損失酶保真度。與正常加熱相比,THz照射可以顯著減少DNA雜交,雙鏈DNA(dsDNA)解鏈變得更容易和更快。同時,PCR的效率和目的DNA的產(chǎn)率都得到了提高。
基于上述研究,研究團隊發(fā)現(xiàn)THz PCR作為一種創(chuàng)新的DNA擴增技術(shù),具有超高的特異性和敏感性,并成功地證明了其在法醫(yī)檢測中的優(yōu)勢。
發(fā)布者:杭州柏恒科技有限公司
聯(lián)系電話:0571-88992477
E-mail:marketing@bio-gener.com

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