眾所周知，甲醛雖然作為免疫組化常用固定劑，但甲醛也會(huì)使組織細(xì)胞許多抗原的免疫活性丟失，從而導(dǎo)致免疫組化染色失敗。采用特殊手段恢復(fù)組織細(xì)胞的免疫活性的方法就是抗原修復(fù)。抗原修復(fù)是免疫組化染色中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，也是較為復(fù)雜繁瑣的一步。

一、抗原修復(fù)的方法
FFPE（甲醛固定、石蠟切片）在水溶性介質(zhì)中加熱，在組織切片脫蠟和水化后，玻片浸沒于修復(fù)液^①中。加熱時(shí)間和溫度直接影響修復(fù)效果。

常用的加熱方法：微波爐、高壓滅菌器、蒸汽鍋、壓力鍋和水浴箱。溫度接近100℃，加熱時(shí)間一般20分鐘就可獲得較滿意的結(jié)果，加熱后放置20~30分鐘緩慢冷卻。接下來介紹常用的高壓抗原修復(fù)法。

高壓抗原修復(fù)操作步驟：

1. 切片常規(guī)脫蠟至水；

2. 蒸餾水洗：3次/2min；

3. 石蠟切片放置于高壓鍋內(nèi)：8~10min；

4. 再次進(jìn)行蒸餾水洗；

5. PBS液洗2分鐘3次；

6. 接連免疫組化染色。

注意事項(xiàng)：將1500~3000ml的抗原修復(fù)液注入高壓鍋中加熱至沸騰，石蠟切片置于切片架上，放入鍋內(nèi)，沒過液面以下，大概加熱5-6min，當(dāng)高壓鍋開始緩慢噴氣時(shí)計(jì)時(shí)2-3min，然后將高壓鍋冷卻至室溫取出石蠟切片后按上述步驟進(jìn)行。如果采用隔水式修復(fù)法，請(qǐng)適當(dāng)將修復(fù)時(shí)間延長(zhǎng)至10分鐘以上。

二、抗原修復(fù)操作繁復(fù)怎么辦？
免疫組化常用切片主要包括石蠟切片和冰凍切片兩種，根據(jù)樣本類型、抗體類型、切片要求等條件的不同，對(duì)應(yīng)免疫組化要求也不同。同時(shí)石蠟切片在免疫組化實(shí)驗(yàn)中制片步驟繁瑣，組織前處理要求高，可能破壞抗原，需要做抗原修復(fù)；而冰凍切片能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步。

想要避開抗原修復(fù)這一步驟，免疫組化切片時(shí)可以選擇冰凍切片。冰凍切片雖然無(wú)需抗原修復(fù)，但在免疫組化時(shí)細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，并且切片厚度也較石蠟的厚，會(huì)直接影響切片質(zhì)量。想要獲得高質(zhì)量冰凍切片，選擇一臺(tái)高質(zhì)量的冷凍切片機(jī)是關(guān)鍵。

三、瑞沃德冷凍切片機(jī)用于免疫組化實(shí)驗(yàn)冷凍切片的優(yōu)勢(shì) 

• 緩解片子偏厚問題

1. 壓縮機(jī)冷量輸出大可做二次溫控補(bǔ)償；PID控溫，使得箱體溫度在一定范圍內(nèi)波動(dòng)且可以自動(dòng)恢復(fù)；

2. 頂/級(jí)十字交叉導(dǎo)軌搭配五相高分辨率步進(jìn)電機(jī)、精密絲桿和水平進(jìn)樣滑塊，組成高精準(zhǔn)進(jìn)樣系統(tǒng)；

3. 以上兩點(diǎn)保證切片無(wú)需設(shè)置過厚就能切出滿足需求的片子。

• 緩解冰晶產(chǎn)生的壓力

冰晶主要產(chǎn)生于樣本冷凍包埋階段，因?yàn)槔鋬鲞^程緩慢從而產(chǎn)生冰晶，這就要求設(shè)備的冷凍效果要滿足樣本速凍需求。瑞沃德冷凍切片機(jī)速凍臺(tái)最低溫度可達(dá)-42℃，快速制冷點(diǎn)溫度最低可達(dá)-60℃，滿足速凍需求，同時(shí)箱體和樣本頭均可單獨(dú)制冷，從而減少冰晶產(chǎn)生，保證切片質(zhì)量。

注釋①：建議修復(fù)液的PH僅2、6、8或10。0.01mol/LpH1或10的Tris-HCI修復(fù)液染色效果較好。

參考文獻(xiàn)：病理技術(shù)大講堂1001問-病理技術(shù)操作疑難點(diǎn)解惑答疑. 席越，陳軍主編.人民衛(wèi)生出版社