濾泡性淋巴瘤(Follicular lymphoma, FL)是最常見的惰性非霍奇金淋巴瘤，在臨床上存在明顯的異質(zhì)性。一些患者可能進(jìn)展為早期淋巴瘤或轉(zhuǎn)化為侵襲性淋巴瘤，通常為彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)，預(yù)后較差。濾泡淋巴瘤國際預(yù)后指數(shù)(FLIPI)，可用于評估患者風(fēng)險和預(yù)測預(yù)后，但不能預(yù)測區(qū)分哪些患者無法達(dá)到EFS12/EFS24（12個月或24個月內(nèi)無發(fā)病癥狀），即早期失敗。目前為止，尚未找到生物標(biāo)志物可以輔助預(yù)測患者是否可以實現(xiàn)EFS12/EFS24。

基于腫瘤微環(huán)境在癌癥治療中的重要作用，梅奧診以及來自美國、意大利、法國中心研究團隊提出腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞的表型和分布可以預(yù)測早期失敗，并且將這些數(shù)據(jù)整合到臨床預(yù)后模型中可以改善濾泡性淋巴瘤患者的風(fēng)險分層的假設(shè)。為此，研究人員結(jié)合CyTOF和CODEX技術(shù)對腫瘤內(nèi)免疫表型進(jìn)行描繪和鑒別，發(fā)現(xiàn)濾泡內(nèi)CD4表達(dá)的缺乏可以預(yù)測濾泡性淋巴瘤的早期失敗，結(jié)合FLIPI系統(tǒng)可以提高高危患者的識別。

研究中共評估了496名患者，通過組織芯片對樣本中的CD4、CD8、FOXP3、CD32b、CD14、CD68、CD70、SIRP-α、TIM3、PD-1和PD-L1進(jìn)行的檢測。先單獨評估免疫組化檢查結(jié)果的預(yù)后價值，然后再聯(lián)合FLIPI進(jìn)行評估，證實了濾泡內(nèi)CD4 +表達(dá)的缺乏是濾泡性淋巴瘤的獨立預(yù)后因素。

濾泡內(nèi)CD4 +表達(dá)的缺乏是濾泡性淋巴瘤的獨立預(yù)后因素

研究團隊進(jìn)一步使用了CODEX 和CyTOF技術(shù)。從生物學(xué)驗證的角度，對患者的腫瘤免疫表型特征和空間定位進(jìn)行了分析。獲得CODEX實驗數(shù)據(jù)后，結(jié)合機器學(xué)習(xí)算法對單細(xì)胞進(jìn)行識別，同時標(biāo)記每個蛋白標(biāo)志物的表達(dá)強度和空間定位。通過無監(jiān)督聚類，鑒定出14個細(xì)胞亞群，包括12個免疫細(xì)胞群，一個血管細(xì)胞群和一個未定義的細(xì)胞群。

鑒別出細(xì)胞表型后，使用T-SNE進(jìn)行降維數(shù)據(jù)可視化。結(jié)合免疫熒光圖像發(fā)現(xiàn)，CD3+ CD8+ T細(xì)胞大多位于濾泡外；CD3+ CD4+ CD45RO+ 記憶性T細(xì)胞主要集中在濾泡內(nèi)，CD3+ CD4+ CD45RO- 非記憶性T細(xì)胞則在濾泡外聚集。

為了更深入地了解腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞和其他微環(huán)境成分的空間關(guān)系，再現(xiàn)組織的動態(tài)空間環(huán)境。基于細(xì)胞-細(xì)胞接觸的特點，識別出13個細(xì)胞鄰域（cellular neiborhood）或細(xì)胞社區(qū)（cellular communities）。值得注意的是，在CD4+ 記憶性T細(xì)胞富集的細(xì)胞社區(qū)中，僅富集激活態(tài)的CD4+ 記憶性T細(xì)胞。對比細(xì)胞類型和鄰近社區(qū)相對于濾泡的分布，濾泡內(nèi)CD4 + T細(xì)胞是激活的、非衰竭效應(yīng)記憶T細(xì)胞。這些細(xì)胞在對抗腫瘤的免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

結(jié)合基因表達(dá)譜的結(jié)果和臨床生存數(shù)據(jù)，可以證明濾泡內(nèi)CD4 +表達(dá)和腫瘤基因表達(dá)譜是濾泡性淋巴瘤的獨立預(yù)后因素。綜合濾泡內(nèi)CD4 +表達(dá)和FLIPI評分，有可能預(yù)測濾泡性淋巴瘤的EFS12/EFS24。

綜上，研究人員使用CODEX技術(shù)對濾泡性淋巴瘤患者樣本中的免疫細(xì)胞表型、空間關(guān)系、空間表型進(jìn)行了深度分析，發(fā)現(xiàn)可以對抗腫瘤的效應(yīng)記憶T細(xì)胞在濾泡內(nèi)富集，并處于激活、非衰竭狀態(tài)，從分子機制層面提供了有效數(shù)據(jù)，支持綜合濾泡內(nèi)CD4 +表達(dá)和FLIPI評分作為未來濾泡性淋巴瘤EFS預(yù)測指標(biāo)的可能性。

關(guān)于CODEX

CODEX技術(shù)是由斯坦福大學(xué)Garry Nolan教授開發(fā)的新一代空間蛋白組學(xué)分析方案，通過將抗體偶聯(lián)上特異性核酸分子條形碼進(jìn)行互補熒光分子檢測，從而實現(xiàn)在一個切片樣本上多達(dá)40個以上靶點蛋白的自動化染色、成像檢測和空間分布數(shù)據(jù)分析，可以很好的解析組織微環(huán)境內(nèi)復(fù)雜的細(xì)胞組成和空間分布。觀看視頻了解CODEX平臺技術(shù)原理。

[參考信息]
1. Lack of intrafollicular memory CD4+T cells is predictive of early clinical failure in newly diagnosed follicular lymphoma. Blood Cancer Journal volume 11, Article number: 130 (2021).