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利用Simoa平臺開發血漿p217+tau的高靈敏度檢測方法

瀏覽次數:2129 發布日期:2021-8-17  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

專題一: 利用Simoa平臺開發血漿p217+tau的高靈敏度檢測方法


Simoa單分子免疫陣列分析技術是目前市面上最靈敏的蛋白分子檢測技術,其可以檢測單個蛋白分子,靈敏度達到飛克級別。在腫瘤、神經、感染免疫、心血管、炎癥、生殖、眼科等領域都有著廣泛應用。Simoa平臺是一個開放的研究平臺,除現有的商品化試劑盒之外,各領域的研究人員都可自行進行方法開發及分析。

來自美國加利福尼亞和比利時比爾塞的科學家通過自行方法開發對p217+tau進行了研究,并將該檢測方法應用于阿爾茲海默癥(AD)的臨床應用評價。

 


Development and validation of a high-sensitivity assay for measuring p217+tau in plasma

Alzheimers Dement (Amst). 2021 May 27;13(1): e12204(IF=14.48)


淀粉樣蛋白β(A)、微管相關蛋白tau蛋白(T)和神經退行性病變(N)為AD的臨床診斷標志。本文利用Simoa平臺開發了p217+tau的檢測方法,對227名受試者的血漿p217+tau蛋白進行了定量檢測,并對其做出臨床應用評價。

結果顯示:p217+tau血漿檢測方法準確、精密、稀釋線性好、靈敏度高。所有檢測的樣本濃度均在線性范圍內,AD組的濃度高于健康對照組,血漿和腦脊液水平相關。血漿p217+tau結果可預測中樞T和A狀態。


兩步法與三步法檢測的比較 

對96例腦脊液(CSF)標本進行檢測,兩步法和三步法的檢測結果緊密相關(r = 0.939)。對10個血清樣本進行檢測時,在兩步分析法中至少有4個樣本顯示異常高信號,而三步分析法比較穩定。

樣品稀釋液的選擇和優化 


使用不同的樣品稀釋液,用三步法檢測四個樣品(3個AD患者的血清樣品和標準品)的p217+tau濃度。結果可知,含HBR9的Tris稀釋液可減少磁珠聚集和假陽性信號。

樣本適用性  

本研究檢測了10名健康對照者和16名輕中度癡呆患者的血清和血漿樣本。結果顯示,輕度至中度癡呆患者的平均濃度明顯高于健康對照組。然而,血漿樣本中的p217+tau的濃度約為血清樣本的2倍。

檢測穩定性  


本研究開發的檢測血漿217+tau的方法,檢測動態范圍寬,稀釋線性好。5次不同檢測的標準曲線信號一致。AD患者血清和血漿樣品(n=4)以1:2、1:3、1:4、1:5和1:6的稀釋度進行檢測,回收率穩定在80%-120%之間,變異系數小于20%。
 

檢測靈敏度和準確性  


本方法開發檢測血漿p217+tau具有良好的靈敏度和準確度。5個質控樣本(1個AD患者血漿pool樣、1個AD患者血清pool樣和3個標準品緩沖液)分別進行檢測,實驗結果變異系數低(5%–15% CV)。對227名受試者(157名輕度至中度癡呆和70名認知正常)的血漿樣本進行了檢測,結果顯示,平均組內精確度為7.1%CV(98.2%的樣本的CV<20%)。



臨床應用  

對16名淀粉樣蛋白陽性癡呆患者的腦脊液和血漿中的p217+tau分別進行檢測,顯示中度正相關(r=0.43)。對227名受試者(69%的輕度至中度癡呆,31%的認知正常)腦脊液和血漿中的p217+tau進行檢測,也證實中度正相關(r=0.35)。將樣本分為淀粉樣蛋白(A)陽性(A+,n=160)或陰性(A-,n=50)受試者,顯示腦脊液與血漿相關性僅見于淀粉樣蛋白陽性受試者(A+受試者與A-受試者的r = 0.27與0.01)。 

 


此外,血漿p217+tau可準確預測中樞淀粉樣蛋白陽性和Tau陽性。


總結  
血漿p217+tau的檢測是一種高度特異、精確、靈敏度高的方法,可以無創地檢測中樞淀粉樣蛋白和tau狀態,有望在不久的將來被納入AD的臨床檢測標準中。
 

發布者:上海生物芯片有限公司
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