專題一: 利用Simoa平臺開發血漿p217+tau的高靈敏度檢測方法

Development and validation of a high-sensitivity assay for measuring p217+tau in plasma

Alzheimers Dement (Amst). 2021 May 27;13(1): e12204（IF=14.48）

兩步法與三步法檢測的比較 

對96例腦脊液（CSF）標本進行檢測，兩步法和三步法的檢測結果緊密相關（r²  = 0.939）。對10個血清樣本進行檢測時，在兩步分析法中至少有4個樣本顯示異常高信號，而三步分析法比較穩定。

樣品稀釋液的選擇和優化 

使用不同的樣品稀釋液，用三步法檢測四個樣品（3個AD患者的血清樣品和標準品）的p217+tau濃度。結果可知，含HBR9的Tris稀釋液可減少磁珠聚集和假陽性信號。

樣本適用性  

本研究檢測了10名健康對照者和16名輕中度癡呆患者的血清和血漿樣本。結果顯示，輕度至中度癡呆患者的平均濃度明顯高于健康對照組。然而，血漿樣本中的p217+tau的濃度約為血清樣本的2倍。

檢測穩定性  

檢測靈敏度和準確性  

本方法開發檢測血漿p217+tau具有良好的靈敏度和準確度。5個質控樣本（1個AD患者血漿pool樣、1個AD患者血清pool樣和3個標準品緩沖液）分別進行檢測，實驗結果變異系數低（5%–15% CV）。對227名受試者（157名輕度至中度癡呆和70名認知正常）的血漿樣本進行了檢測，結果顯示，平均組內精確度為7.1%CV（98.2%的樣本的CV<20%）。

臨床應用  

對16名淀粉樣蛋白陽性癡呆患者的腦脊液和血漿中的p217+tau分別進行檢測，顯示中度正相關（r² =0.43）。對227名受試者（69%的輕度至中度癡呆，31%的認知正常）腦脊液和血漿中的p217+tau進行檢測，也證實中度正相關（r² =0.35）。將樣本分為淀粉樣蛋白（A）陽性（A+，n=160）或陰性（A-，n=50）受試者，顯示腦脊液與血漿相關性僅見于淀粉樣蛋白陽性受試者（A+受試者與A-受試者的r²  = 0.27與0.01）。 

此外，血漿p217+tau可準確預測中樞淀粉樣蛋白陽性和Tau陽性。

總結  
血漿p217+tau的檢測是一種高度特異、精確、靈敏度高的方法，可以無創地檢測中樞淀粉樣蛋白和tau狀態，有望在不久的將來被納入AD的臨床檢測標準中。