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常用的免疫組織化學染色方法(上)

瀏覽次數:2618 發布日期:2021-8-13  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

常用的免疫組化染色方法很多,有直接法和間接法。直接法是將酶或熒光素等標記在第一抗體上,然后用該被標記的第一抗體與組織細胞中的抗原結合,即可以顯色或在熒光顯微鏡下觀察結果;

 

間接法是將標記物標記在第二抗體或第三抗體(復合物)上,其方法是先將特異性的第一抗體與組織細胞中相應的抗原結合,再將被標記上標記物的第二抗體與第一抗體結合,最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結果。

 

如果標記物是標記在第三抗體(復合物)上,則第二抗體與第一抗體結合后,再用被標記上標記物的第三抗體(復合物)與第二抗體結合,最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結果。

 

01  ABC 法  
 

卵白素-生物素復合物(avidin biotin complex,ABC)法屬于親和免疫組織化學技術,該方法是根據卵白素和生物素具有高度親和力的生物學特性,用生物素與過氧化物酶結合獲得生物素化過氧化物酶,生物素化過氧化物酶再和加入的卵白素形成卵白素-生物素-過氧化物酶復合物即ABC復合物。

 

ABC法為三步法,第二抗體為生物素化的IgG,其中的Fab片段和第一抗體結合,生物素和ABC復合物中的卵白素結合,最后通過ABC復合物上的過氧化物酶參與顯色反應而形成有顏色的不溶性沉淀物。由于卵白素和生物素的親和力極強,所以ABC法較敏感,比PAP法敏感20~40倍。


   


02  LSAB(S-P) 法 
 

標記抗生物素蛋白鏈菌素-生物素(lablled streptavidinbiotin)法和ABC法相似,不同處是在第二抗體之后ABC法用ABC復合物而LSAB法用標記了過氧化物酶的抗生物素蛋白鏈菌素(streptavidin,SA)。SA是從鏈霉菌屬蛋白分離出來的一種蛋白質,它僅標記了過氧化物酶而本身沒有與生物素連接,生物素是連接在第二抗體上。

 

由于SA分子量較小,ABC復合物分子量大,因而SA穿透組織的能力比ABC復合物大,反應速度快。SA有兩個和生物素親和力極高的結合點,其本身沒有連結生物素,可以與第二抗體上的生物素連結。這樣,SA比ABC復合物更容易與第二抗體上的生物素結合,因而SA的敏感性比ABC高,反應所需的時間比ABC短。

如在實驗中遇到困難,也可以選擇Leica全自動免疫組化染色儀來協助您。
 

  

 

下期預告

酶標聚合物(labelled dextran polymer,LDP)法

增強聚合物一步(enhanced polymer one setp,EPOS)法

催化信號放大(catlyzed signal amplification,CSA)法

抗生物素蛋白鏈菌素-生物素復合物(streptavidin biotincomplex,SABC)法

發布者:廣州東銳科技有限公司
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