核酸定量哪家強？熒光探針VS分光光度法
瀏覽次數：1781 發(fā)布日期：2020-10-22
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DNA編碼所有的遺傳信息，是創(chuàng)造所有生物生命的藍圖。它充當允許遺傳物質在世代之間傳遞的存儲設備。而RNA充當讀取DNA中存儲信息的讀卡器。DNA中存儲的遺傳信息由RNA攜帶，同時RNA充當核糖體的信使，并在核糖體中合成蛋白質。分子生物學這整個過程稱為“中心法則”。
基于核酸的檢測的范圍繼續(xù)擴大，關于選擇核酸檢測方法有很多。
目前常用的是分光光度法，分光光度法利用了核酸的紫外吸收特性。核酸，包括DNA和RNA，均由脫氧核糖或核糖、磷酸基及含氮堿基構成。其中，由于堿基含有芳香環(huán)結構，因此具有紫外吸收的特性。通過測定260nm處的吸光度，對DNA和RNA進行定量。與此同時，還能通過計算OD260/OD280估計核酸的純度。由于此法不具有選擇性，無法區(qū)分DNA、RNA或蛋白質。檢測數值極易受到其他污染物(如游離核苷酸、鹽和有機化合物)和堿基組成差異的影響。
今天給大家介紹熒光染料法，AAT開發(fā)的多款熒光染料可以特異地與雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA相結合，并在特定波長光源的激發(fā)下，發(fā)出熒光，這一系統不會檢測到樣本中可能存在的其他雜質分子，熒光強度與樣品中的靶分子濃度相對應。
DNA和RNA定量試劑
Helixyte Green dsDNA定量試劑（17597）和StrandBrite Green RNA定量試劑（17611）分別對雙鏈DNA和單鏈RNA進行了優(yōu)化。它們對核酸有很高的親和力，對結合核酸有極大的熒光增強作用，使得在幾分鐘內直接檢測復雜溶液中微量核酸成為可能，而且一般不會受到其他生物分子的干擾。
圖1.小牛胸腺DNA中使用Helixyte 綠色和PicoGreen進行DNA定量。由圖看出Helixyte 綠色和PicoGreen 具有幾乎相同的性能。
Helixyte Green是一種出色的核酸定量試劑，與dsDNA結合后可顯著增強熒光。它具有與PicoGreen®相同的光譜特性，因此是PicoGreen®的絕佳替代品（PicoGreen®是Invitrogen的商標）。它是可用于定量溶液中DNA的最敏感的染色劑之一。使用Helixyte Green，您可以在ssDNA，RNA和游離核苷酸存在的情況下選擇性地檢測低至25 pg / ml的dsDNA。該測定法在三個數量級上是線性的，并且?guī)缀鯖]有序列依賴性，使您能夠準確地測量來自多種來源的DNA，包括基因組DNA，病毒DNA，微量制備DNA或PCR擴增產物。
在進行Northern雜交分析、S1核酸酶分析、RNase保護分析、cDNA文庫制備、反轉錄PCR之前，檢測和定量少量RNA對于多種分子生物學過程非常重要，例如測量體外轉錄RNA的產量和測量RNA濃度。測量核酸濃度最常用的技術是在260nm處測定吸光度，吸光度法的主要缺點是蛋白質、游離核苷酸和其他紫外線吸收化合物的干擾，但使用敏感的熒光核酸試劑可以緩解這種干擾問題。StrandBrite RNA定量試劑是一種用于溶液中RNA定量的超靈敏熒光核酸染料。StrandBrite RNA定量試劑可以用熒光酶標儀或熒光分析儀檢測到低至5ng/mL的RNA。
Helixyte Green dsDNA和StrandBrite Green RNA探針的優(yōu)勢：
- 高靈敏度：Helixyte Green和StrandBrite Green的靈敏度比UV吸收率測定法高10,000倍
- 選擇性高：與紫外吸收的測量不同，這些檢測不受蛋白質，游離核苷酸或非常短的寡核苷酸的影響，從而使完整的寡核苷酸和核酸的定量在復雜混合物（例如血清或全血）中更加準確。
- 操作簡單：這些檢測方法非常簡單，不需要分離步驟，因此非常適合自動化，高通量篩選
- 檢范圍廣：對于Helixyte Green的檢測，定量在四個數量級內都是準確的。基于StrandBrite 的熒光檢測在三個數量級上都是準確的。
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