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X-Gluc——擬南芥GUS染色

瀏覽次數(shù):10208 發(fā)布日期:2019-9-11  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
該產(chǎn)品是檢測(cè)大腸桿菌中uidA基因(β-葡萄糖苷酶基因β-glucuronidase, GUS)的底物。Gus 基因作為一種報(bào)告基因,在植物遺傳轉(zhuǎn)化研究中有廣泛的用途。Gus基因來(lái)自于大腸桿菌,編碼β-葡聚糖苷酶(一種水解酶),可催化底物5-溴-4-氯-3-吲哚葡聚糖醛酸苷(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide,縮寫(xiě)為X-Gluc)分解,產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的深藍(lán)色化合物,借此用來(lái)觀察轉(zhuǎn)基因植物中外源基因的表達(dá)情況,鑒定轉(zhuǎn)基因植株。
本品以X-GLUC的環(huán)已胺鹽形式提供。CAS 114162-64-0,達(dá)到分子生物學(xué)和植物轉(zhuǎn)化研究級(jí)別。粉末形式提供,可溶于DMF配置20mg/ml儲(chǔ)存液中,低速渦旋充分溶解,避光低溫保存。


GUS染色步驟:
1.取材:將葉片、花瓣、根莖等組織剪成小片,放于1.5ml離心管中。
注:用于染色的植物材料的制備方法要因涉及的特定組織和器官的不同而異。例如,擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗的根就可以不作任何預(yù)處理而直接染色。但是像煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉就必須在染色前切成薄片(1-3mm)。當(dāng)操作大的組織和樣品時(shí),可以選用真空滲入法來(lái)幫助底物滲入細(xì)胞。
2.染色:加入適量配制好的GUS染色工作液至完全覆蓋材料;錫箔紙包好后搖床搖動(dòng)10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間至材料出現(xiàn)藍(lán)色。注意要做陰性和陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)。
3.洗脫:將材料轉(zhuǎn)入無(wú)水乙醇或80%丙酮中脫色2-3次,至陰性對(duì)照材料為白色。GUS染色陽(yáng)性的藍(lán)色斑點(diǎn)很穩(wěn)定,在酒精中不褪色。
4.觀察:一般染色后,GUS染色陽(yáng)性的藍(lán)色斑點(diǎn)肉眼就能看到。但是有些材料可能藍(lán)色斑點(diǎn)很細(xì)微,要在顯微鏡下才能看到。
http://www.warbio.cn/rczp/show-1080.html
發(fā)布者:南京沃博生物科技有限公司
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