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雙光子顯微切割系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)和高效硬組織切割方法

瀏覽次數(shù):5035 發(fā)布日期:2019-9-2  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
硬組織的病理觀測(cè)對(duì)于研究骨骼、牙齒等器官疾病的發(fā)展具有很重要的意義。但是硬組織由于其本身硬度大難以被傳統(tǒng)的薄片切割機(jī)直接切割,因此在切割之前往往需要脫鈣處理,使其軟化以達(dá)到刀片所能夠承受的硬度范圍內(nèi)進(jìn)行切割。但是鈣質(zhì)作為骨骼和牙齒的組成部分,進(jìn)行脫鈣將不可避免的丟失所研究器官中的信息,尤其是在含鈣量高的牙釉質(zhì)等部位中。同時(shí),鈣在早期硬組織愈合如牙質(zhì)修復(fù)、骨創(chuàng)傷愈合等過程中也起著重要作用。另外脫鈣還不可避免的改變了硬組織的形貌,諸如厚度變化、褶皺、軟硬組織分離等問題。因此尋找無需脫鈣的切割方法對(duì)于研究硬組織研究是十分必要的。
隨著激光技術(shù)的發(fā)展,這一難題有望得到解決。對(duì)于刀片切割來說,受到刀片材料本身的限制,無法切割比刀片更硬的物體,但是這個(gè)困難在激光切割中并不存在 。然而激光切割也有其缺點(diǎn):首先作為一種高能光束,其本身蘊(yùn)含的能量較高容易灼傷物體表面,從而影響切割效果;另外受到激光在穿透物體時(shí)將不可避免的被所穿透物體中的組分散射,從而限制了激光切割的深度。近幾年發(fā)展較為迅速的雙光子聚焦技術(shù)給激光3D切割帶來了新的可能。
雙光子切割具有如下優(yōu)勢(shì):首先雙光子能夠穿透一定深度的樣品,因此能夠直接在物體內(nèi)部進(jìn)行切割,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)組織深層區(qū)域的切割;其次雙光子的聚焦點(diǎn)能夠精準(zhǔn)控制,可實(shí)現(xiàn)以往切割設(shè)備不能實(shí)現(xiàn)的3D切割;另外雙光子一般采用近紅外激光作為激發(fā)光源,這類激光往往擁有最佳穿深并且對(duì)于蛋白的吸收較低,基本不會(huì)灼傷樣品。最后雙光子切割相比于傳統(tǒng)打磨方法來說更為精準(zhǔn),樣品的損失更少。
 
 
 
在制樣上來說,雙光子切割也十分的簡單。根據(jù)目前文獻(xiàn)上主要采用的方法可以總結(jié)為:首先使用甲醛固定,然后使用PMMA包埋,接下來使用雙光子激光切割設(shè)備切割,經(jīng)過簡單打磨后,就可以染色壓片了。這比起傳統(tǒng)的硬組織切割步驟更為簡單,制備時(shí)間更短。并且制備效果比傳統(tǒng)方法更優(yōu)。
 
 
 


雙光子切割實(shí)際效果圖精選

觀察骨組織的修復(fù)過程
 
激光切割人體第四腰椎垂直切片前部。C. SEM; D. PLM; E. SEM + PLM。從圖中可以清晰看到骨組織表面修復(fù)。 

觀察基因缺陷對(duì)骨組織的影響 
 
 
小鼠脛骨的SEM圖像。A.Phospho1敲除(KO)的脛骨近端顯示非礦化基質(zhì)類骨;B. 脛骨骨干。白色箭頭顯示骨髓內(nèi)表面的骨樣斑塊。黑色箭頭顯示位于皮質(zhì)血管的骨樣區(qū)(向下至20-50 lm區(qū)域)的大小變化;C. 膝蓋。致密纖維結(jié)締組織骨膜位于白色箭頭處;D.WT的對(duì)照關(guān)節(jié)。 

觀察手術(shù)后的骨組織再生
 
 
節(jié)段性缺損愈合的組織形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)。a-d。Safranin Orange/von Kossa染色觀測(cè)修復(fù)手術(shù)愈合效果的脛骨代表性圖片,LA,外側(cè);ME,內(nèi)側(cè);PR,近端;DI,遠(yuǎn)端,對(duì)側(cè)鋼板。e.手術(shù)后周內(nèi)采集的對(duì)照樣本作標(biāo)本圖片。自體松質(zhì)骨移植(ABG)對(duì)蜂巢的增強(qiáng)作用黑色(藍(lán)色星)和支架中心孔內(nèi)明顯的截骨術(shù)血腫(白色星)仍然可見。 

牙齒病理觀測(cè) 
 
   
 大鼠牙本質(zhì)切片觀測(cè)  人牙齒切片觀測(cè)


參考文獻(xiàn)
[1] Will, Fabian, and Heiko Richter. "Laser‐based Preparation of Biological Tissue: Femtosecond lasers speed up histological procedures in Medtech." Laser Technik Journal 12.5 (2015): 44-47
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產(chǎn)品詳情
雙光子3D組織切割成像系統(tǒng):http://www.qd-china.com/products2.aspx?id=300
發(fā)布者:Quantum量子科學(xué)儀器貿(mào)易(北京)有限公司
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