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ACE HILIC色譜柱方法開發指南Ⅴ - HILIC法平衡要點

瀏覽次數:6907 發布日期:2019-4-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
HILIC法平衡時間

在RPLC模式下,可再現保留所需的典型柱平衡約為10倍柱體積。

圖14中可清楚反映這一點
但是,對于HILIC分離則不同。通常,HILIC色譜柱的平衡時間比RPLC色譜柱的更長。

這是該技術的一個特點,也是可再現保留所必需的。
在固定相粒子周圍建立和形成穩定的水合層對可再現HILIC色譜法很重要(HILIC色譜法的重現性至關重要)。

所花費的時間也因相位(固定相)特性、洗脫劑和分析物而各有不同,因此取決于具體應用。

下面的指導原則可用作近似法(近似的參考)。

重要的是:在HILIC方法開發中,平衡將作為各項分離的一個參數進行研究(對于每一個成熟的分離方法,在HILIC方法開發時,平衡時間都將作為一個參數進行研究)。
對于全新的未使用色譜柱,建議使用60-80倍柱體積,以在最初建立HILIC所需的水層。

 

圖14
RPLC和HILIC模式中達到全新未使用色譜柱所需的柱體積數的對比

一旦建立水層,可實現可再現(重現性)和一致的保留和色譜法(可實現色譜方法的重現性,一致的保留時間)。
運行完成后,應清洗色譜柱并根據第9節中相關指導說明儲藏。

對于色譜柱第二次以及之后的每次運行,建議只采用20倍柱體積,以達到穩定的保留次數(時間),見圖15。

 

圖15
HILIC模式中第二次及隨后每次分析達到平衡所需的柱體積數對比
色譜柱:ACE 5 HILIC-A,
100 x 3.0 mm
流動相:10 mM甲酸銨,pH4.7(溶于MeCN/H2O中)(90:10 v/v)
流速:0.43 mL/min
溫度:25 °C
檢測:UV, 214 nm
樣本:
1) 2’-脫氧鳥苷
2) 4-羥基苯甲酸
3) 沙丁胺醇

 

梯度HILIC平衡

同時,ACE HILIC相也可以使用可再現梯度HILIC法(ACEHILIC色譜柱也可重現HILIC方法的梯度洗脫)。

經確定,兩次進樣之間大約需要10倍柱體積。兩次進樣之間的平衡時間低于新色譜柱所需的時間,因為只需要重新建立起始條件。

新色譜柱需要平衡,以在固定相顆粒上形成水合層(而新色譜柱需要長時間平衡,是因為需要在固定相顆粒上形成水合層)。

 

圖16
顯示了兩次進樣之間使用20倍柱體積平衡情況下,兩次連續進樣梯度HILIC分析的極佳保留再現性。

發布者:廣州菲羅門科學儀器有限公司
聯系電話:020-22826668
E-mail:vink@gzflm.com

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