ACEA Quanteon流式細胞儀在檢測循環腫瘤細胞CTCs上的應用
循環腫瘤細胞(Circulating Tumor Cells, CTCs)是指自發或因診療操作自實體腫瘤原發灶或轉移灶脫落進入外周血循環的腫瘤細胞，是腫瘤復發和發生遠端轉移的關鍵因素。CTCs檢測有助于惡性腫瘤的早期診斷、療效監測、預后判斷、耐藥性評估等，其臨床應用價值已被廣泛認可【1,2】。由于CTCs的稀有性，流式細胞術鑒定CTCs需有較高靈敏度。
實驗設計
CTCs在患者血液中的含量非常稀少，大約每106~107個白細胞中僅1個至幾個CTCs存在，靈敏度一直是其檢測及應用的主要障礙。在眾多文獻報道中，人們常利用腫瘤細胞摻入試驗評價CTCs檢測方法/系統的靈敏度、特異性、準確性、重復性等指標。
本研究選用高表達EpCAM的結腸癌細胞株（SW620）作為摻入細胞（圖1），第一部分將不同數量（0～256個）SW620細胞摻入到1×106個正常人PBMCs中，用ACEA Quanteon流式細胞儀檢測SW620細胞的實際個數，確定儀器檢測CTCs的靈敏度。
一、SW620細胞表面EpCAM表達鑒定
圖1. SW620細胞表面EpCAM表達鑒定。將新鮮血（2mL）或摻有SW620細胞的新鮮血（1000個/2mL）用Ficoll-Paque PLUS淋巴細胞分離液（GE healthcare,17-1440-02）分離PBMCs后，在以上樣本以及單獨SW620細胞中分別加入抗CD45-FITC和抗EpCAM-APC抗體孵育，設同型抗體對照，在ACEA Quanteon流式細胞儀上測試，數據采用相同設門策略分析。a. SW620細胞用IgG1 FITC和IgG2b APC同型抗體染色的結果； b-d. SW620細胞、新鮮血和摻有SW620的新鮮血用CD45-FITC和EpCAM-APC抗體染色的結果。
二、ACEA Quanteon可檢測到106個正常人白細胞中的1個腫瘤細胞
圖2. 靈敏度分析。收集對數生長期的SW620細胞，標記 EpCAM-APC熒光抗體，設同型抗體對照，冰上孵育60min，用含0.5%BSA的D-PBS洗兩遍；將染色后的SW620細胞按0，2，4，8，16，32，64，128，256，512個（體積20μL）分別摻入2×106個PBMCs（體積180μL）中，渦旋混勻（理論上，每100μL中含SW620細胞數：0，1，2，4，8，16，32，64，128，256），在ACEA Quanteon流式細胞儀上中速采集100μL，記錄EpCAM+細胞數量。A. 設門策略。FSC-SSC散點圖上設P1門去除碎片和雜信號，基于P1門，在散點圖上表現為EpCAM+的細胞即為摻入的SW620細胞；B. ACEA Quanteon流式細胞儀上的測試結果；
結論
ACEA Quanteon流式細胞儀檢測結果顯示，在不同細胞數量摻入水平，實際檢出細胞數量與理論數量之間呈現良好的線性關系，靈敏度為0.0001%，即可檢測到106個正常人白細胞中的1個腫瘤細胞，證明ACEA Quanteon流式細胞儀在檢測CTCs方面具有高靈敏度。
參考文獻
[1] 循環腫瘤細胞檢測與臨床應用進展。趙倩雯，司徒博，鄭 磊。南方醫科大學學報, 2017, 37(10): 1423-1426
[2] 循環腫瘤細胞的研究進展。王宜文，胡孔旺。安徽醫科大學學報，2017，52(12)：1897-1900
*文章來自艾森生物
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