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石斑魚虹彩病毒(GIV)核酸檢測試劑盒(一管式恒溫?zé)晒夥ǎ┦褂谜f明書

瀏覽次數(shù):3410 發(fā)布日期:2018-6-8  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

石斑魚虹彩病毒(GIV)核酸檢測試劑盒(一管式恒溫?zé)晒夥ǎ?/P>

◆ 產(chǎn)品說明

動(dòng)物疫病檢測系列基于獨(dú)特的恒溫?zé)晒鈾z測技術(shù),可針對(duì)食品、動(dòng)物組織等樣品中病害的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增,通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于石斑魚昏睡病的虹彩病毒(GIV)的檢測,檢出限為103copies/μl基因組DNA

◆ 產(chǎn)品組成(48測試)

032051M

試劑

含量

A-GIV-I

  22μL× 48管

B-I

  90μL × 1支

NG-I

  50μL × 2支

PG-GIV-I

  50μL × 1支

 

◆ 適用儀器

Dhelix-C、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308C等恒溫?zé)晒鈾z測儀,ABI 7500,LightCycler480,CFX 96等熒光PCR儀。

◆ 自備耗材和儀器

①滅菌1.5mL或2.0mL離心管;②冰盒;③移液器(0.1-2.5μL,0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套滅菌吸頭;④離心機(jī);⑤渦旋混勻器;⑥金屬浴

注意事項(xiàng)

1.本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染,實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。

   1)第一區(qū):樣本制備區(qū)。

 2)第二區(qū):模板添加區(qū)。

   3)第三區(qū):擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。

★分區(qū)之間最好進(jìn)行物理性隔離,避免人為因素造成的污染。

2.實(shí)驗(yàn)過程中穿戴工作服和乳膠手套,不同區(qū)域獨(dú)立使用工具,需更換手套和實(shí)驗(yàn)服。

3.嚴(yán)格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書要求在冰盒上操作。

4.反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感,應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,推薦使用前離心30秒。

5.反應(yīng)結(jié)束后,擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄,當(dāng)日清理,開蓋易造成氣溶膠污染,禁止開蓋。

6.不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用,在有效期內(nèi)使用。

◆ 樣品處理

參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)處理樣品,制備的樣本保存待用。

詳細(xì)步驟請(qǐng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作或查閱食安通軟件。

◆ 實(shí)驗(yàn)操作

1. 模板制備(樣本制備區(qū))

   建議使用配套水生動(dòng)物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產(chǎn)品,具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

2.添加模板(模板添加區(qū),放置于冰盒中進(jìn)行)

      取出所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管,將試劑完全解凍,解凍后打開管蓋向各管管底分別加入1μL B-I,蓋上管蓋離心1 min。打開管蓋分別沿各管管壁上加入2μL模板,順序?yàn)镹G-I、待測樣品模板、PG-GIV-I。蓋好PCR管蓋后,離心3 min,立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

3. 擴(kuò)增反應(yīng)(擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū))

①恒溫儀器63℃條件下反應(yīng)30 min。

②若使用熒光定量PCR儀,則熒光基團(tuán)選擇FAM,淬滅基團(tuán)選擇None,將63℃ 15 s,63℃ 45 s作為一個(gè)循環(huán),于63℃ 45 s處收集熒光信號(hào),30個(gè)循環(huán)。 

其他儀器請(qǐng)參照儀器說明書進(jìn)行設(shè)置。

◆ 結(jié)果判定

①儀器自動(dòng)判定結(jié)果,若顯示“陽性”,則樣品中含有石斑魚虹彩病毒(GIV);若顯示“陰性”,則樣品中不含有石斑魚虹彩病毒(GIV)或含量低于檢測限。如在20min~30min間出現(xiàn)曲線上揚(yáng)而自動(dòng)判讀結(jié)果為陰性,可能由于樣品含量較低導(dǎo)致,建議對(duì)樣品進(jìn)行富集或延長反應(yīng)時(shí)間至45min進(jìn)行復(fù)核。

②在熒光定量PCR儀上,根據(jù)有無“S”型擴(kuò)增曲線判定結(jié)果。若有“S”型擴(kuò)增曲線,則樣品中含有石斑魚虹彩病毒(GIV);若無“S”型擴(kuò)增曲線,則樣品中不含有石斑魚虹彩病毒(GIV)或含量低于檢測限。

 

  • NG反應(yīng)管結(jié)果顯示“陰性”,PG反應(yīng)管結(jié)果顯示“陽性”,此次檢測結(jié)果有效,否則無效。如重復(fù)檢測結(jié)果仍為無效,請(qǐng)與技術(shù)支持人員聯(lián)系。
發(fā)布者:上海一基實(shí)業(yè)有限公司
聯(lián)系電話:021-60536261
E-mail:2851717098@qq.com

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