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FAQs:chromotek-GFP和RFP常見問題解答

瀏覽次數(shù):2205 發(fā)布日期:2017-3-13  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

ChromoTek 常見問題解答

1、GFP-Trap®可識別的GFP衍生物類型有哪些?
    (1) eGFP, wtGFP, GFP S65T
(2) TagGFP
(3) eYFP, YFP, Venus, Citrin
(4) CFP
不能識別:TurboGFP,所有的RFPs

 2、RFP-Trap®可識別的RFP衍生物類型有哪些?
(1) mRFP
(2) mCherry
(3) mOrange
(4) mPlum
(5) mRuby
(6) mKate2
    不能識別:DsRed、mRFPruby、TagRFP、所有GFPs

 3、Nano-Trap® (GFP-Trap® / RFP-Trap®) 的結(jié)合能力如何?
    Nano-Trap®的結(jié)合能力取決于珠子。每10μL漿液,瓊脂糖珠可結(jié)合2~3μg GFP,磁性顆?山Y(jié)合0.25-~0.5μg GFP。

 4、可以從GFP-Trap洗脫結(jié)合蛋白么?
    關(guān)于定量洗脫,可以將樣品至于SDS上樣緩沖液中95℃煮10min(詳見protocol),或者在0.2 M的甘氨酸(pH2.5)中孵化0.5~2min,隨后用0.1體積的1M Tris堿中和。

5、是否可以從GFP-Trap洗脫出自然狀態(tài)的結(jié)合蛋白,比如,在凝膠遷移實驗或功能分析實驗中?
    可以嘗試洗脫游離的GFP。但是,請注意,這種方法,不能定量洗脫出目標(biāo)融合蛋白。

 6、怎樣才能避免非特異性的蛋白與GFP-Trap交互作用而結(jié)合?
    關(guān)鍵操作步驟,是在孵化液中稀釋洗滌劑的濃度。我們建議,洗滌劑為終濃度0.1%(如NP-40 或TX-100),且最終體積不少于0.4mL。另外,我們建議,要測定各種洗滌緩沖液的鹽濃度,使其范圍在150mM-500mM范圍內(nèi),以去除非特異性結(jié)合的親水性蛋白。

7、在binding過程中,N-端與C-端GFP融合蛋白之間是否存在差異?
    GFP-Trap®對C-末端的GFP融合蛋白的親和力稍高,若要消除這種差異,可以加長孵化時間(1-2h取代15-30min)

 8、是否可以在組織樣品(即變性緩沖液)中直接純化GFP標(biāo)記的融合蛋白?
    原則上,GFP-Trap®即使在惡劣的緩沖條件下(如,RIPA緩沖液,含0.1%SDS或1M尿素),也非常穩(wěn)定。

 9、可結(jié)合的GFP-Trap®珠的GFP結(jié)構(gòu),是否有大小限制?
    無。

 10、如果在洗脫液中,有剩余的背景怎么辦?
    建議使用Chromotek的blocked particles(bab-20 or bmp-20)對樣品進(jìn)行預(yù)處理。

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標(biāo)簽: chromotek-GFP RFP
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