如何檢測細(xì)胞凋亡？

細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。

細(xì)胞凋亡的研究方法

一、定性和定量研究

只定性的研究方法：常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場倒轉(zhuǎn)瓊脂糖凝膠電泳、形態(tài)學(xué)觀察（普通光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡）

進(jìn)行定量或半定量的研究方法：各種流式細(xì)胞儀方法、原位末端標(biāo)記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。

二、區(qū)分凋亡和壞死

可將二者區(qū)分開的方法：瓊脂糖凝膠電泳，形態(tài)學(xué)觀察（透射電鏡是是區(qū)分凋亡和壞死最可靠的方法），Hoechst33342/PI雙染色法流式細(xì)胞儀檢測，Annexin-V/PI雙染色法流式細(xì)胞儀檢測等。

不能將二者區(qū)分開的方法：原位末端標(biāo)記法、PI單染色法流式細(xì)胞儀檢測等。

激光全息技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡

M4激光全息成像及分析系統(tǒng)采用激光穿透細(xì)胞形成干涉條紋，由計算機(jī)轉(zhuǎn)化為3D圖像，通過對活細(xì)胞與死細(xì)胞不同的折射率分析細(xì)胞凋亡過程。真正實現(xiàn)細(xì)胞非損傷、非標(biāo)記、非侵害性保證細(xì)胞最真實的生長狀態(tài)，免去對細(xì)胞進(jìn)行顯微鏡觀察時的前期處理傷害，節(jié)省時間，操作簡單。是結(jié)合定性和定量的新型研究技術(shù)。

實時檢測細(xì)胞凋亡的過程

1) HoloMonitor M4體型較小，可以將其放置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，細(xì)胞培養(yǎng)皿中無需做其他處理，直接置于HoloMonitor M4顯微鏡，即不改變細(xì)胞培養(yǎng)的條件、同時對細(xì)胞進(jìn)行實時監(jiān)控分析，清晰區(qū)分細(xì)胞壞死和細(xì)胞凋亡，對于細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞的體積變小、胞質(zhì)濃縮，卷曲、核染色質(zhì)凝聚。染色體斷裂成片，最后形成凋亡小體，被吞噬細(xì)胞消化，融合等這些形態(tài)學(xué)的變化。以下是觀察前列腺癌細(xì)胞DU145的凋亡圖片。

2) HoloMonitor M4分析系統(tǒng)可以對細(xì)胞在不同時間及不同的凋亡過程進(jìn)行形態(tài)學(xué)參數(shù)的分析，統(tǒng)計凋亡細(xì)胞數(shù)量的變化，真正做到了對細(xì)胞非侵入、非標(biāo)記的細(xì)胞凋亡的定量分析。

3) 目前毒理學(xué)，腫瘤學(xué)，胚胎學(xué)，心血管疾病，神經(jīng)退行性病變， 炎癥， 免疫系統(tǒng)疾病， 藥物治療，神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育等研究都涉及到細(xì)胞凋亡的研究。

在藥物篩選方面，為驗證藥物的藥效，可以對細(xì)胞不同處理后觀察細(xì)胞凋亡率來計算IC50值來反映新藥物的療效。上圖是經(jīng)etoposide不同濃度的處理后通過散點圖表示細(xì)胞的凋亡情況及細(xì)胞死亡數(shù)量的統(tǒng)計。