越鞠丸醇提物對孕前應激誘導的產后抑郁小鼠模型的快速抗抑郁作用

摘要 目的：以孕前應激誘導建立產后抑郁（PPD）小鼠模型，觀察越鞠丸醇提物（YJ）對該模型的快速抗抑郁作用。方法：將40只 BALB/C雌鼠隨機分為２組，空白對照組不予任何刺激，孕前應激組給予慢性束縛刺激。3周后孕前應激組小鼠雌雄合籠交配懷孕，于分娩后３周檢測模型組母鼠行為學，包括蔗糖偏好測試（SPT）、強迫游泳測試（FST）、懸尾測試（TST）及陌生環境攝食實驗（NSFT）。造模成功后，將模型組隨機分為4組：模型組、越鞠丸醇提物組、氯胺酮組、氟西汀組。越鞠丸醇提物及氯胺酮為單次給藥，氟西汀為連續21ｄ給藥。結果：產后3周，與空白對照組相比，孕 前 應 激 誘 導 的 產 后 抑 郁 組 模 型 母 鼠 在 糖 水 偏 好 測 試 中 的 蔗 糖 消耗 百 分 比 顯 著 降 低 （P<0.001），在強迫游泳測試和懸尾測試中絕望狀態不動時間顯著增加（P<0.01，P<0.01），在陌生環境攝食實驗中攝食潛伏時間明顯增加而單位時間攝食量顯著減少（P<0.01，P<0.01）。單次給予ＹＪ 和氯胺酮２4ｈ之后，模型組母鼠的糖水消耗百分比顯著增加（P<0.01），強迫游泳和懸尾測試的絕望不動時間明顯降低（P<0.01，P<0.01），陌生環境攝食測試中潛伏時間顯著縮短且單位時間攝食量明顯增加（P<0.01，P<0.01），而氟西汀組未顯示相同作用。結論：氟西汀連續給藥對于孕前應激誘導的PPD模型小鼠無明顯治療作用，提示該模型可能屬于難治性抑郁模型；在此模型上，越鞠丸具有與西藥氯胺酮一致的快速抗抑郁作用。

關鍵詞 產后抑郁；孕前應激；越鞠丸；快速抗抑郁；氯胺酮

產后抑郁癥 （ｐｏｓｔｐａｒｔｕｍ　ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ，PPD）是產褥期精神綜合征中最常見的一種類型，以分娩后出現情緒低落，精神抑郁為主要癥狀，臨床以沮喪、悲傷、哭泣、易煩躁、易激動，甚至出現幻覺，或有自殺及傷嬰等一系列表現。PPD 嚴重危害產婦及嬰兒身心健康，給家庭和社會也帶來嚴重影響。PPD被認為是難治性抑郁。由于一線抗抑郁西藥的副作用及局限性，不能有效地治療 PPD，因此尋找快速安全有效且無明顯副作用的中藥變得迫切而實際。越鞠丸出自《丹溪心法》，功能行氣解郁，是治療抑郁癥的經典方劑，臨床上常用于抑郁癥的治療。本課題組前期研究發現越鞠丸對多個品系的小鼠模型具有與氯胺酮相似的快速抗抑郁作用，但該作用未在 PPD 動物模型上得到證實。PPD 的產生與多種因素相關，既往的應激性生活事件被認為是 PPD 發病的重要風險因素。本研究探索以孕前應激法構建 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠 PPD模型，以越鞠丸醇提物干預，觀察越鞠丸對PPD模型小鼠的作用，以研究孕前應激對 PPD 致病的影響并驗證越鞠丸對PPD的快速抗抑郁作用。

1材料與方法

１．１實驗動物 清潔級健康成年雌性BALB/C小鼠４０只，體質量１８－２４ｇ，軍事醫學科學院提供，動物合格證號：２００７０００５８１３０３。適應性飼養 １ 周后用于實驗。動物房室溫２５ ℃、濕度為４５％，明暗交替時間為１２ｈ，動物可以自由飲食進水。

１．２越鞠丸醇提物（Ｙｕｅｊｕ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ，ＹＪ）制備實驗用中藥材購于南京中醫藥大學國醫堂門診，經本校藥學院專家鑒定，為中國藥典收載品種。取蒼術、神曲、香附、梔子、川芎５種藥材粉碎，過１００目篩，按等分重量混合后浸泡在９５％乙醇中（６倍體積）４８ｈ，期間不停攪拌。靜置后取上清，同樣過程重復兩次，收集３次的上清液后過濾，減壓濃縮至無乙醇。加入Ｔｗｅｅｎ－８０作為乳化劑（終濃度為0.5％），配制為實驗所需濃度－２０ ℃保存備用。將濃縮后的ＹＪ 進行高效液相色譜（ＨＰＬＣ）分析，按照實驗室之前確立的方法檢驗不同批次ＹＪ 的指紋圖譜及穩定性，并對其主要成分定量分析以進行質控。

１．３實驗試劑  鹽酸氯胺酮（ｋｅｔａｍｉｎｅ，Ｋｅｔ）注射液為福建古田制藥廠生產（批號：２０１４０３０１）。臨用前用生理鹽水配成３０ｍｇ／ｍｌ的藥液。鹽酸氟西汀（Ｆｌｕｏｘ－ｅｔｉｎｅ，Ｆｌｘ）為美國 Ｓｉｇｍａ公司 產品，根 據 Ｄｕｌａｗａ方法以生理鹽水配成濃度１８ｍｇ／ｋｇ的藥液。

１．４實驗方法

１．４．１　動物分組及模型的制備小鼠隨機分為２組：空白對照組（ｎ＝８）和孕前應激組（ｎ＝３２），空白對照組不予任何應激，孕前應激組小鼠每天給予６ｈ束縛應激刺激（１１∶００－１７∶００）。３周后將孕前應激組以一雌一雄分籠交配飼養。大約４周后，母鼠分娩，被定義為 ＰＰＤ模型組（Ｍｏｄ）。

將模型組母鼠隨機分為 Ｍｏｄ組（ｎ＝８），ＹＪ 組（ｎ＝８），Ｋｅｔ組（ｎ＝８），Ｆｌｘ組（ｎ＝８）。Ｆｌｘ組自產后第１天始每日腹腔注射 Ｆｌｘ注射液每１０ｇ體重０．１ｍｌ（相當于每克小鼠給予氟西汀０．０１８ｍｇ），持續２１ｄ。產后第２０天，根據薛文達等的研究結果，ＹＪ 組予ＹＪ 濃度１３．５ｇ／ｋｇ，以每１０ｇ體重０．１ ｍｌ灌 胃（相 當 于 每 克 小 鼠 給 予 越 鞠 丸 生 藥０．０１３　５ｇ），Ｋｅｔ組予 Ｋｅｔ注射液每１０ｇ體重０．１ｍｌ腹腔注射（相當于每克小鼠給予氯胺酮０．０３ｍｇ），２４ｈ后，檢測各組母鼠的一系列行為學表現。

１．４．２　小鼠的行為學測試指標

１．４．２．１　蔗糖偏好試驗 （ｓｕｃｒｏｓｅ　ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｔｅｓｔ，ＳＰＴ）根據 Ｄｕｌａｗａ方法改進，在應激之前，對應激組和空白對照組予兩瓶２％蔗糖溶液適應３ｄ。禁水禁食１８ｈ后，小鼠單籠飼養，每籠給予一瓶２％蔗糖溶液和一瓶自來水，觀察 ２ｈ 蔗糖消耗量。蔗糖消耗計算公式為：蔗糖偏好百分比（％）＝［（蔗糖攝入量）/（蔗糖攝入量＋水的攝入量）］×100。

１．４．２．２強迫游泳實驗（ｆｏｒｃｅｄ　ｓｗｉｍ　ｔｅｓｔ，ＦＳＴ）采用上海欣軟信息科技有限公司的強迫游泳視頻分析系統，將小鼠分別放入玻璃燒杯中，水溫保持在２４－２６ ℃。讓小鼠在其中游泳２ｍｉｎ后，立刻開始觀察記錄接下來的４ｍｉｎ內小鼠總的不動時間：即小鼠在水中停止掙扎，或呈漂浮狀態，僅有細小的肢體運動。

1.4.2.3懸尾實驗（ｔａｉｌ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ　ｔｅｓｔ，TST）采用上海欣軟信息科技有限公司的懸尾測試視頻分析系統，用膠帶將小鼠懸掛于距臺面３０ｃｍ 的支架邊緣上，膠帶ｔｔ粘貼位置在距小鼠尾尖1cm處。每只小鼠共懸掛5min，記錄其在最后4min的不動時間。

1.4.2.4陌生環 境 攝 食 實 驗 （ｎｏｖｅｌｔｙ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄｆｅｅｄｉｎｇ　ｔｅｓｔ，ＮＳＦＴ）小鼠禁食 ２４ｈ 后，被放置在一個新的鼠籠內，底部鋪上厚約１ｃｍ 的墊料，中心放置已經稱重的糧食。放入后，檢測小鼠開始吃食的潛伏時間。以吃食的潛伏期和消耗食物的重量為觀測指標。如果小鼠５ｍｉｎ內沒有吃食則定義為潛伏時間是５ｍｉｎ。小鼠單位時間攝食量（ｇ）＝５ｍｉｎ內消耗糧食重量（ｇ）／小鼠體質量（ｇ）。

１．５統 計 學 處 理　 測 量 結 果 以 珔ｘ±ｓ表 示，應 用ＳＰＳＳ　２０．０ 統計分析軟件對多組間數據進行單因素方差分析，ｐｏｓｔ　ｈｏｃ　ｔｅｓｔ選用 ＬＳＤ 方法，Ｐ＜０．０５為差異具有統計學意義。

3討論

產后抑郁的病因復雜，與生物、社會、心理等因素密切相關。有學者發現PPD與多個風險因子有明顯的關系，包括心理社會應激，不良生活事件，既往和家庭心境障礙史等多方面因素。既往的應激性生活事件被認為是 PPD 發病的重要風險因素，可能是因為持續的應激能增加易感性個體發生情感障礙的可能性。

本實驗中，我們采用慢性孕前應激對適齡BALB/ｃ雌鼠造模，通過對產后 3周母鼠的蔗糖偏好試驗、強迫游泳測試、懸尾測試及陌生環境攝食測試評估該PPD模型，發現該模型小鼠出現了快感缺失，興趣下降，行為絕望以及伴有焦慮現象，這與PPD患者的臨床癥狀極為相似，因此模型的建立是成功的。常規的PPD西醫治療主要包括心理治療和抗抑郁藥物治療。選擇性 ５－羥色胺再攝取抑制劑（Ｓｅ－ｌｅｃｔｉｖｅ　Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ　Ｒｅｕｐｔａｋｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＳＳＲＩｓ）類是目前抗抑郁治療中應用較多的一線抗抑郁藥物。氟西汀是ＳＳＲＩｓ類代表藥物，但其臨床上存在起效緩慢、影響哺乳等不良反應，且有三分之一的病人對其無治療反應。本實驗中，連續２１ｄ的氟西汀給藥對孕前應激誘導PPD模型小鼠的一系列抑郁樣行為均無明顯作用，提示該模型可能是一種難治性抑郁模型。這與目前研究認為PPD屬于難治性抑郁的觀點相一致。目前越來越多的學者致力于尋求能夠治療難治性抑郁的快速起效抗抑郁藥物。

ＮＭＤＡＲ（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｄ－ａｓｐａｒｔａｔｅ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）的拮抗劑氯胺酮目前被公認為是可用于治療難治性抑郁、具有快速抗抑郁作用的藥物。在臨床研究及動物實驗上，單次亞麻醉劑量的氯胺酮即可發揮快速持久的抗抑郁的作用。但是，由于氯胺酮具有的神經毒性和成癮性等副作用，使其不能用于臨床。我們可以氯胺酮為陽性參照，尋找具有與其一致的快速抗抑郁作用且沒有其副作用的理想藥物。近代中醫認為產后抑郁癥可歸屬于中醫“郁病”范疇。產后抑郁病因復雜，幾種病因又相兼為病，虛實夾雜，以郁為主。同時現代女性由于受家庭、生活等方面的壓 力，郁 證 尤 多，出 現 “六 郁 并 集、諸 郁 并見”的病因病機。這與朱丹溪對于郁證的認識相同。丹溪指出：“氣血沖和，萬病不生，一有怫郁，諸病生焉”并創立了越鞠丸。《丹溪心法》云：“越鞠丸，解諸郁”。該方由蒼術、川芎、香附、神曲、山桅組成，專為郁病而設，重在理氣解郁，兼顧六郁。

古往今來越鞠丸作為治療抑郁癥的經典方劑，許多學者對其進行了研究。于雷統計了近３０年的越鞠丸治療抑郁癥的臨床案例，發現其總有效率達９３．６５％，且副作用很低。尉小慧對越鞠丸抗抑郁活性進行研究，發現越鞠丸抗抑郁樣作用是全方配伍綜合作用的效果。本課題組前期發現以越鞠丸單次給藥，在ＩＣＲ 和昆明小鼠上具有與氯胺酮相似的快速抗抑郁功效。本研究發現單次給予ＹＪ２４ｈ后能夠顯著改善孕前應激PPD小鼠模型的行為 學 指 標 。與ＰＰＤ模 型 組 相 比 ，ＹＪ組 顯 著 增 加 模型母鼠的糖水偏愛百分比，降低模型母鼠在強迫游泳測試和懸尾測試中的絕望不動時間，縮短模型母鼠陌生環境攝食測試中的潛伏時間和增加其單位時間內攝食量，差異均有統計學意義。本研究發現在孕前應激PPD小鼠模型上，ＹＪ 具有與氯胺酮一致的快速抗抑郁作用。

總之，孕前應激誘導的 PPD小鼠模型是一種具有實驗研究價值的PPD動物模型。常規抗抑郁藥物氟西汀的慢性給藥對該模型無明顯治療作用，提示該模型可能是一種難治性抑郁模型。而ＹＪ對PPD小鼠模型具有與氯胺酮相似的快速抗抑郁作用，提示越鞠丸可用于治療難治性抑郁。本研究為快速治療PPD的中藥新藥研發提供了依據，可以更好地指導產后抑郁癥的治療。