HE染色

蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡稱HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色 ；伊紅為酸性染料 ，主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。

1適用范圍

組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研。

2原理

易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱為嗜堿性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia )；而對堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱為中性（neutrophilia)。
組織內(nèi)的蛋白質(zhì)構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸的種類很多，它們有不同的等電點。在普通染色法中，染色液的酸堿度為pH6左右，細胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細胞核的染色質(zhì)、腺細胞和神經(jīng)細胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜堿性。而細胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜酸型。如果改變?nèi)旧�液的酸堿度，pH值升高時，則原來被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性；pH值降低時，原來被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝浴Ｋ�以說染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng)。
脫氧核糖核酸（DNA）兩條鏈上的磷酸基向外，帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷的陽離子結(jié)合使胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明對比。伊紅是細胞漿的良好染料。
由于組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質(zhì)不一樣。經(jīng)蘇木精染色后，細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色，可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍，如處理適宜，可使細胞核著清楚的深藍色，胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿，使胞漿的各種不同成分又呈現(xiàn)出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細胞成分與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)特點均可顯示出來。

3試劑與儀器

A：0.5~1% 的伊紅酒精溶液：
稱取伊紅Y 0.5~1 g，加少量蒸餾水溶解后，再滴加冰醋酸直至漿糊狀。以濾紙過濾，將濾渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工業(yè)酒精，如果不怕浪費，用無水乙醇配制也可）100毫升溶解。
B：蘇木素染液配方：(配制3000 ml，可按比列減少)
蘇木精6 g
無水乙醇100 ml
硫酸鋁鉀150 g
蒸餾水2000 ml
碘酸鈉1.2 g
冰醋酸 120 ml
甘油 900 ml
配制方法：將蘇木素溶于無水乙醇，再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水，溶解后將甘油傾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸鈉。
C：1%鹽酸酒精分化液：將1毫升濃鹽酸加入99毫升70%酒精中即可。[

4操作步驟

常規(guī)he染色步驟

(1)二甲苯（Ⅰ） 15min
(2) 二甲苯（Ⅱ） 15 min
（3）二甲苯：無水乙醇=1:1 2min
(4)100%乙醇（Ⅰ） 5min
(5)100%乙醇（Ⅱ） 5 min
(6)80%乙醇 5min
(7)蒸餾水 5 min
(8)蘇木精液染色 5 min
(9) 流水稍洗去蘇木精液 1-3 s
(10) 1%鹽酸乙醇 1-3 s
(11) 稍水洗 10-30 s
(12)蒸餾水過洗 1-2 s
(13) 0.5%伊紅液染色 1-3 min
(14) 蒸餾水稍洗 1-2 s
(15) 80%乙醇稍洗 1-2 s
(16) 95%乙醇（Ⅰ） 2-3 s
(17) 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 s
(18) 無水乙醇 5-10 min
(19) 石炭酸二甲苯 5-10 min
(20) 二甲苯（Ⅰ） 2 min
(21) 二甲苯（Ⅱ） 2 min
(22) 二甲苯（Ⅲ） 2 min
(23) 中性樹膠封固
注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步?jīng)_水時間需延長至20-30min。
②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用無水乙醇。

注意事項

切片脫水透明 切片經(jīng)HE染色后，要徹底脫水透明，才能用中性樹膠封蓋。如果脫水不徹底，封片后呈白色霧狀，鏡下觀察模糊不清，且容易褪色。切片1-2級無水乙醇脫水，
也可使用石炭酸二甲苯進行脫水。石炭酸有較強脫水能力，但長時間可使切片脫色，因此要經(jīng)過多次二甲苯以使石碳酸完全除去。

5結(jié)果的判斷編輯

實驗結(jié)果

細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色，軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍色，粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈橘紅色，蛋白性液體呈粉紅色。[1] 
著色情況與組織或細胞的種類有關(guān)，也隨其生活周期及病理變化而改變。例如，細胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿，當(dāng)其衰老時或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時，伊紅著色由淺變深。

H-E染色評定標準：

（1）切片完整，厚度4-6微米，厚薄均勻，無皺褶無刀痕；
（2）染色核漿分明，紅藍適度，透明潔凈，封裱美觀。[3]