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如何用TL2020組織研磨破碎儀研磨內臟及腫瘤細胞提取RNA

瀏覽次數:6628 發布日期:2015-8-13  來源:鼎昊源科技

鼎昊源科技通過大量樣品破碎測試發現,動物組織樣品相比其他樣品更難破碎,特別是一些內臟組織、結締組織、心臟肌肉組織、肺部組織,一般很難用手工或者常規組織勻漿儀徹底破碎。因為這些動物組織樣品一般韌性較大,如果使用手工研磨或者組織勻漿儀,不僅一次處理量太少、易污染且難清洗,處理后的樣品還不夠均勻細致,達不到后續提取RNA等實驗的要求。2015年3月 - 4月,北京某生物公司研發人員使用TL2020組織研磨破碎儀(又稱TL2020高通量組織研磨儀)研磨內臟及腫瘤細胞,后續提取RNA,實驗順利,效果很好,以下是本次研磨實驗的主要流程,可供相關實驗人員參考:

【材料準備】

·樣品種類:人體腫瘤細胞、胰腺、前列腺、脂肪、肌肉,每個組織各研磨2個樣品,用液氮處理保存。

·研磨配件種類:鼎昊源TL2020組織研磨破碎儀2.0ml研磨管適配器(28×2.0ml)1對,6mm不銹鋼研磨珠若干顆。

【研磨實驗流程】

1. 高溫滅菌預處理6mm不銹鋼研磨珠;

2. 將滅菌處理過的研磨珠與研磨管適配器置入液氮中同時進行預冷處理;

3. 將樣品從液氮中取出,在研缽中切割成約4-5mm寬的樣品小塊。

4. 在2ml無菌圓底離心管(進口)中依次加入:預冷6mm研磨鋼珠1顆、切好的樣品塊1塊、預冷6mm研磨鋼珠1顆。

5. 確保離心管中有2顆6mm研磨鋼珠和1塊樣品塊后,快速蓋好管蓋,對稱放入預冷的2.0ml研磨管適配器孔槽中。

6. 將適配器固定在TL2020組織研磨破碎儀的兩個搖臂上,設置轉速1800rpm,時間120S(胰腺樣品180S),一鍵開始研磨。

8. 研磨時間結束,卸載適配器取出離心管,在管中快速加入裂解液,然后按照后續RNA提取實驗步驟操作。

【研磨效果】

·后續成功提取出RNA,且電泳圖條帶清晰可見。

圖1:TL2020組織破碎儀實機照片

圖2:離心管中研磨后的樣品

圖3:提取的RNA電泳圖

 

本實驗中,使用TL2020組織研磨破碎儀一次性高速破碎56個2ml的內臟樣品組織,不僅操作靈活方便,還能安全輕松地進行液氮冷凍研磨操作,保證了RNA提取等溫度敏感性后續實驗的順利進行。此外,用TL2020進行類似的動物樣品組織研磨,避免了樣品間的交叉污染,省去了清洗儀器的繁瑣工作,對于樣品量巨大且需要無菌操作的實驗,無疑大大提高了效率。

聲明:本文由鼎昊源科技原創,不經同意嚴禁轉載抄襲,違者必究!
聲明:本文由鼎昊源科技原創,不經同意嚴禁轉載抄襲,違者必究!
發布者:鼎昊源(天津)生物科技有限公司
聯系電話:010-58650065
E-mail:chenyajing@herosbio.com

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