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使用Ostro樣品制備板結合LC-MS/MS對牛奶中的獸藥多殘留進行篩查

瀏覽次數:7279 發布日期:2014-12-23  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

簡介

Ostro樣品制備板可對生物樣品中的堿性藥物和相關化合物進行簡單、快速的LC-MS測定。Ostro樣品板為液液萃取、蛋白質沉淀、過濾以及后續從最終萃取物中清除磷脂提供了方便。本文運用Ostro樣品板對牛奶中的獸藥多殘留進行了篩查。使用此樣品板只需簡單的幾個步驟即可有效沉淀蛋白質并除去潛在的干擾物質,從而完成牛奶樣品的制備。萃取的樣品通過樣品板時,蛋白質通過過濾被去除,而磷脂干擾物則通過被保留在專利的吸附劑上被去除。完成簡單的樣品制備步驟之后,使用UPLC-MS/MS對復溶樣品進行分析。為了證明本方法的適用性,我們從主要的獸藥種類中選擇了具有代表性的化合物,包括四環素、氟喹諾酮、磺胺類、大環內酯、β-內酰胺和β-腎上腺素能藥物。

樣品制備

將125 μL牛奶轉移至樣品板孔中(樣品體積不得大于125 μL)。加入375 μL 0.2%甲酸的乙腈(ACN)溶液。抽吸幾次以使其充分混合。洗脫至收集板中。加入100 μ L 200 mM甲酸銨的甲醇/ACN(50:50)溶液,充分混合。蒸干并復溶于100 μL ACN/25 mM甲酸銨水溶液(25:75)中。圖1展示了使用Ostro樣品板時的SPE典型設置。

結果與討論

多殘留分析

Ostro樣品板的結果與之前發表的方法1相當。然而,Ostro樣品板操作耗時更少,并且更適用于高通量分析。使用此方法,一般分析人員可在幾分鐘內制備10個甚至更多的樣品,而采用之前的方法則需幾個小時。圖2顯示了恩諾沙星(10 μg/ L)基質匹配標準品的典型LC-MS色譜圖。盡管對于大部分其它化合物來說,使用該方法分析時表現出相似的分析性能,但仍然無法對10 μg/ L濃度的金霉素、土霉素和林可霉素進行定量分析。最近研發了一種四環素的替代方法2。表2示出了觀察到的多殘留牛奶分析的回收率數據。

磷脂去除

牛奶中含有大量的磷脂,約占其總脂肪含量的1% 3。在LC分離中,這些磷脂會直接干擾后洗脫的化合物。此外,結果表明磷脂殘留的累積會使反相LC分離的性能變差4。圖3展示了采用為鑒定磷脂而選擇的MRM通道(m/z184>184)對牛奶樣品進行分析的UPLC-MS/MS色譜圖。下圖展示了使用Ostro樣品板處理牛奶樣品獲得的結果。上圖為采用蛋白質沉淀(未經SPE純化)獲得的結果。Ostro樣品板可有效去除超過98%的磷脂。

結論

■ 展示了使用Ostro樣品制備板從牛奶中快速萃取多種獸藥。
■ 除四環素外,該方法對其它所有種類的被測化合物均表現出良好的篩查分析性能。
■ 使用Ostro直通式樣品制備板可有效去除牛奶萃取物中的幾乎全部磷脂。

參考文獻

1. Optimized Extraction and Cleanup Protocols for LC-MS/MS Multi-Residue Determination of Veterinary Drugs in Edible Muscle Tissues, Waters Application Note 720004144en

2. HPLC/UV Determination of Tetracyclines in Milk Using Mixed-Mode SPE and eXtended
Performance [XP] 2.5 μm Columns, Waters Application Note 720004582en

3. Contarini, G and Povolo, M., Phospholipids in Milk Fat: Composition, Biological and Technological Significance, and Analytical Strategies, Int. J. Mol. Sci, 14(2), 2808–2831(2013)

4. Eliminating Phospholipids in Drug Discovery Extractions Using a Fast, Generic Sample Clean-up Method, Waters Application Note 720004046en

發布者:沃特世科技(上海)有限公司
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