韩国免费A级作爱片无码_亚洲欧洲精品成人久久av18_亚洲国产成人AV毛片大全_成年人在线免费看的惊悚动作片_一级爽片_爱爱免费

English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個(gè)人登錄 | 郵件訂閱
當(dāng)前位置 > 首頁(yè) > 技術(shù)文章 > TA克隆常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

TA克隆常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

瀏覽次數(shù):4156 發(fā)布日期:2014-9-8  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
TA克隆方法(Original TA Cloning Kit)把PCR片斷與一個(gè)具有3-T突出的載體DNA連接起來(lái)的方法。因?yàn)镻CR反應(yīng)中所適用的聚合酶具有末端轉(zhuǎn)移的活性,通常在3加上A。例如:Taq聚合酶同時(shí)具有的末端連接酶的功能,PCR反應(yīng)時(shí)在每條PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的3端自動(dòng)添加一個(gè)3-A突出端。只有用經(jīng)過(guò)特殊處理的具有3-T突出末端的DNA片斷才能通過(guò)T/A配對(duì)進(jìn)行連接。通過(guò)PCR的方法擴(kuò)增目的基因片斷的過(guò)程中,由于往往不清楚目的基因的DNA序列,獲得的目的片斷通常需要通過(guò)TA克隆的方法,重組到T-載體中,通過(guò)序列測(cè)定清楚DNA序列。
 
由于在PCR過(guò)程中,使用的DNA聚合酶不同,往往分為2種情況:(1)使用不同的Taq酶,在PCR擴(kuò)增循環(huán)結(jié)束后,加上72℃ 10分鐘一個(gè)過(guò)程,Taq酶可以在擴(kuò)增產(chǎn)物的3末端加上A,因此PCR產(chǎn)物回收純化后可以和T載體直接連接。(2)使用高保真的DNA聚合酶,如pfu酶,由于其不能在擴(kuò)增產(chǎn)物的3末端加上A,得到的DNA序列為鈍端,因此,需要在回收純化后進(jìn)行加A的過(guò)程,通常是以PCR回收產(chǎn)物為模板,加上一定量的普通Taq酶和反應(yīng)液,加入dATP(或dNTP), 72℃ 10分鐘,然后將加A產(chǎn)物直接用于TA連接。
 
TA克隆常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
 
發(fā)布者:北京康潤(rùn)誠(chéng)業(yè)生物科技有限公司
聯(lián)系電話:400-666-3332
E-mail:yan.zhang@gene-star.com

標(biāo)簽: TA克隆
用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊(cè) 忘記密碼
評(píng)論只代表網(wǎng)友觀點(diǎn),不代表本站觀點(diǎn)。 請(qǐng)輸入驗(yàn)證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 看黄网站免费观看 | 精品久久香蕉国产线看观看亚洲 | 日本一道本线一区免费 | 成人日日夜夜 | 日韩一区二区黄色片 | 日韩在线卡2卡3卡4卡5卡免费 | 污污内射在线观看一区二区少妇 | 日韩中文字幕在线一区二区三区 | 亚洲综合一 | 亚洲小说春色综合另类 | 裸体女人高潮毛片扒开一一区 | 欧美熟妇另类久久久久久不卡 | 国产特黄特级AAAAA片 | 综合精品一区 | 九色 在线| 色yeye在线视频观看 | 凹凸69堂国产成人精品 | 精品国产乱码一区二区三区在线 | 成人网站www污污污网站 | 四虎最新地址 | 夜夜爱夜夜做夜夜爽 | 亚洲中文字幕日产无码成人片 | 日韩精品无码一区二区三区av | 中文天堂在线资源www | 日韩爱情动作片 | 亚洲香蕉伊综合在人在线观看 | 国产精品美女久久久久AV福利 | 国产精品边做奶水狂喷 | 国语FREE性XXXXXHD | 啪啪综合视频 | 日韩无套无码精品 | 欧美精品一区久久 | 狠狠躁夜夜躁人人爽天天5 四虎在线精品 | 久久精片 | 国产精品欧美精品日韩精品 | 天天天天做夜夜夜做 | 亚洲日韩乱码中文无码蜜桃臀网站 | A级一男一女牲交 | 色偷偷色噜噜狠狠成人免费视频 | 久久这里只有精品6 | 国产精品日韩专区 |