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RNA酶污染的預防措施

瀏覽次數:1481 發布日期:2014-9-8  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
RNA的的化學性質比DNA活躍得多。RNA分子上緊鄰磷酸二脂鍵的2′羥基基團能直接被RNA酶利用來作為活性因子,從而使得RNases無需金屬離子就能發揮活性。由于RNA酶在環境中廣泛存在,特別是RNase A,結構極其穩定,不能通過高溫高壓滅菌失活,因而極難消除,對保持RNA樣品的完整性構成極大的威脅。由于RNase A類酶依賴于活性位點處的組氨酸殘基起催化作用,因此能被組氨酸烷化劑DEPC所抑制。為了避免RNA降解,RNA相關實驗都嚴格應遵循下述操作規則:
 
1.使用RNase-free溶液;
 
2.佩戴清潔一次性手套并經常更換;
 
3.建立RNA工作專區,使用專用的移液器和RNase-free槍頭;
 
4.使用無菌的一次性塑料器皿,盡量避免使用玻璃器皿;
 
5.金屬工具可以用快速灼燒數秒鐘的方式來快速消除污染;
 
6.玻璃器皿可在180℃以上溫度下烘焙數小時,或用新鮮配制的0.1%(v/v) DEPC或無水乙醇浸泡一小時后,高壓滅菌去除殘余的DEPC;
 
7.電泳槽等含聚碳酸脂或聚苯乙烯材料的器皿應該在3%的過氧化氫中浸泡10分鐘,然后用大量的RNase-free水沖洗干凈后使用;
 
8.塑料制品可用新鮮配制的0.1% (v/v) 的DEPC水浸泡過夜,然后高溫高壓滅菌1小時水解殘留的DEPC;
 
9.試劑處理:
1)每升溶液中加入1 ml的DEPC,室溫振蕩過夜或37℃振蕩1小時后,高溫高壓滅菌1小時水解殘留的DEPC;
2)由于DEPC可以和初級氨基基團起反應,故含Tris的溶液不宜用DEPC處理。應使用新開瓶(RNA專用)的Tris粉末,溶于DEPC處理水或Milli-Q水中,適用RNA專用電極調整pH值后,高溫高壓滅菌;
3)對于遇熱不穩定的化合物(如DTT、核苷、錳鹽等),應直接將其(最高純度)溶于DEPC處理水或Milli-Q水中,使用0.2 μm的濾膜過濾滅菌;
4)無水乙醇、異丙醇等試劑開瓶后作RNA專用;75%乙醇應使用無水乙醇與DEPC處理水配制;
5)反應體系中添加RNA酶抑制劑。
發布者:北京康潤誠業生物科技有限公司
聯系電話:400-666-3332
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