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使用UPC2/MS/MS對蛋白沉淀血漿中的極性化合物直接進樣

瀏覽次數:2194 發布日期:2014-3-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

Jennifer L. Simeone and Paul D. Rainville

目的
對蛋白沉淀血漿中的強極性化合物直接進樣分離,以進行生物分析。

背景
大多數生物分析方法都采用蛋白質沉淀(PPT)提取法,這是因為該技術簡單、快速且成本較低。典型的PPT使用3:1的有機溶劑與生物樣品,可得到大約75%的有機提取物。傳統上,通常會采用反相液相色譜(RPLC)分析樣品。對于強極性化合物而言,由于強溶劑作用產生的色譜峰形較差,最為明顯的是出現峰前伸和/或譜峰分叉,因此不能直接將高濃度有機提取物注入RPLC系統。因此,在向色譜系統進樣之前需要進行額外的樣品處理,包括蒸發和復溶或用水稀釋。

通過從RPLC到UPC2改變MS入口技術,無需蒸發和復溶等額外樣品制備步驟,便可以直接進樣分離高度有機樣品中的極性化合物。

圖1. 在反相模式下運行的UPLC®中,咖啡因PPT提取物通過(a)1 µL進樣、(b)3µL進樣獲得的示例色譜圖,以及在ACQUITY UPC<SUP>2</SUP>系統中,相同咖啡因PPT提取物的(c)7µL進樣示例色譜圖。

圖1. 在反相模式下運行的UPLC®中,咖啡因PPT提取物通過(a)1 µL進樣、(b)3µL進樣獲得的示例色譜圖,以及在ACQUITY UPC2系統中,相同咖啡因PPT提取物的(c)7µL進樣示例色譜圖。

解決方案
UltraPerformance Convergence Chromatography™(UPC2®)使用超臨界二氧化碳作為主要流動相,其保留機制與RPLC不同,可直接進樣高度有機提取物。在本示例中,通過PPT提取法使用乙腈以3:1的比率從大鼠血漿中提取了四種極性較強的化合物,直接進樣至ACQUITY UPC2™系統中,并使用傳統RPLC系統作為對比。UPC2分析在ACQUITY UPC2 BEH色譜柱上進行,采用經氫氧化銨改性的甲醇作為共溶劑(流動相B)。RPLC分析在配備ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱的ACQUITY UPLC®系統上進行,采用水和經氫氧化銨改性的乙腈作為流動相。

圖1將含咖啡因的PPT提取物在ACQUITY UPLC系統中的1µL直接進樣和3 µL直接進樣與在ACQUITYUPC2系統中的7µL進樣進行了對比。RPLC中的1µL進樣顯示出良好的峰形,但在3µL進樣體積下峰形發生變形,可以觀察到前伸峰和譜峰分叉。而采用UPC2進行的7µL進樣依然表現出良好的峰形。以相同方式測試的其它極性分子也觀察到類似的結果(表1)。表1還顯示了使用RPLC和UPC2時,在PPT提取物中測試的所有分析物的最大進樣體積。

表1還顯示了使用RPLC和UPC<SUP>2</SUP>時,在PPT提取物中測試的所有分析物的最大進樣體積。

這些數據明確證實了使用ACQUITY UPC2系統分析高度有機提取物中極性化合物的優勢,并且不必像RPLC系統那樣在進樣前需要進行額外的樣品制備,從而簡化了工作流程。

總結
通過從標準RPLC到UPC2改變MS入口技術,無需蒸發和復溶等額外樣品制備步驟,便可以直接在ACQUITY UPC2系統中注入溶于高度有機樣品中的極性化合物。為生物分析實驗室增添UPC2可以簡化高度有機樣品制劑中極性化合物的分析。

發布者:沃特世科技(上海)有限公司
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