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高純度exosomes分離方法

瀏覽次數:7549 發布日期:2013-11-21  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
    外泌體(Exosomes)是一種直徑在40~100 nm的圓形單層膜結構,可由機體眾多類型細胞釋放,并廣泛分布于唾液、血漿、乳汁、尿液等體液當中。外泌體可攜帶多種蛋白質、mRNA、miRNA,參與細胞通訊、細胞遷移、血管新生和腫瘤細胞生長等過程。2007 年,Valadi等發現細胞分泌的外泌體中含有生物學活性的mRNA、microRNA,使得研究人員對外泌體的研究熱情激增。
    傳統的外泌體分離要涉及超速離心,操作繁瑣、過程冗長,所得到的外泌體純度較低。美國101Bio提供的系列外泌體分離試劑盒,可從細胞培養基或血清中富集大量完整的外泌體,試劑盒具有
 
ü  方便——無需超速離心;
ü  快捷——不到2個小時即可完成外切體分離純化;
ü  高回收率——是超速離心的5~10倍;
ü  高純度——所得外切體純度高達95% 以上;
ü  僅需2ml的細胞培養基或200ul血清,即可獲得足夠的外切體用于下游研究。
 
PureExo®Exosomes Isolation Kit for Cell Culture Media
 
試劑盒組分
Solution A、Solution B、Solution C和PureExo® Columns
操作步驟
1.  無血清培養或血清饑餓48小時的細胞培養液于4℃ 600 g 離心10mins取上清;
2.  在玻璃管中按照比例加入細胞上清液及ABC混合液搖勻;
3.  于4℃孵育1h后出現分層;
4.  棄上層培養基,并將其余液體轉移至EP管;
5.  1000g離心3mins,出現分層,棄上層培養基及下層無色澄清液體;
6.  上述步驟重復操作一次;
7.  室溫干燥5~10mins后用1X PBS重懸;
8.  重懸液轉移至純化柱中,2000g離心5mins;
9.  收集流出液即為外切體。
 
發布者:北京西美杰科技有限公司
聯系電話:4000-50-4006,010-88597838,021-63599871/72(上海分公司)
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